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MS培养基是目前使用最普遍的培养基。下面介绍ms培养基工作液的配制步骤及配方表。
(1)配制1升工作液,烧杯中放入700ml左右的蒸馏水,按顺序分别吸取MS-A母液20ml、MS-B母液10ml、MS-C母液10ml、MS-D母液10ml、MS-E母液10ml。
(2)加入固体蔗糖30g(根据具体实验调节浓度),溶解。
(3) 加入所需的激素。定容至1000ml。
(4)0.1-1mol/l的HCl或NaOH调整pH值。
(5)如果配制固体培养基加入一定浓度的琼脂。琼脂浓度为10%~15%。
(6) 液体培养基可选择高温高压灭菌和过滤消毒2种方法。固体培养基采用高温高压灭菌方法。倒入三角瓶等培养器皿中,封口消毒。
(7)工作液配制的注意事项:
由于培养基内有丰富的营养物质,极利细菌和真菌繁殖,造成污染,影响组培的成功,一般有高温高压消毒和过滤消毒两种方法。
高温高压消毒: 一般用消毒锅消毒,注意消毒锅不能装的过满,锅内保持1.1Kg/cm2的压力,温度120℃左右,大约15-20分钟即可。
过滤消毒: 一些易受高温破坏的培养基成分如IAA、IBA、ZT等,不宜用高温高压法消毒,可用过滤消毒,可过滤消毒后再加入已高温高压消毒的培养基中,过滤消毒应在无菌室或超净工件台上进行,以避免污染培养基。
附表:
组成成分
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数量(mg/l)
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组成成分
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数量(mg/l)
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NH4NO3
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1650
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Na2-EDTA
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37.3
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KNO3
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1900
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FeSO4·7H2O
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27.8
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CaCl2·2H2O
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440
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CuSO4·5H2O
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0.025
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MgSO4·7H2O
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370
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蔗糖
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30
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KH2PO4
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170
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肌醇
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100.0
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KI
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0.83
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烟酸
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0.5
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H3BO3
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6.2
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盐酸吡哆醇
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0.5
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MnSO4·4H2O
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22.3
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甘氨酸
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2.0
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ZnSO4·7H2O
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8.6
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盐酸硫铵等
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0.4
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Na2MoO4·2H2O
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0.25
|
|
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CoCl2·6H2O
|
0.025
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pH
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5.8
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