核酸电泳的步骤方法介绍

本篇文章由专业生化试剂供应商诺博莱德为您提供。

核酸电泳是进行核算研究的重要手段，常用于琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶两种，凝胶电泳操作简单，是分离鉴定和纯化核算的一种常用方法，那么核酸电泳的步骤有哪些的呢？

琼脂糖凝胶电泳的步骤：
用透明胶将玻璃板或电泳装置所配备的塑料盘的边缘圈封，制成胶模，置水平工作台上；
(2) 称取适量琼脂糖，置电泳缓冲液中，加热使琼脂糖溶解；
(3) 待溶液冷至60℃，加入10mg/ml EB贮存液，使终浓度达0.5mg/ml；
(4) 在距离胶模底板0.5-1mm处放置电泳梳，将琼脂糖溶液倒入胶模中，厚度约3-5mm，注意避免产生气泡；
(5) 凝胶完全凝固后，移去梳子和透明胶，将凝胶放入电泳槽。加入TBE缓冲液使恰好没过胶面约1mm；
(6) 将DNA样品与1/6体积加样缓冲液混合后，加入样品槽中；
(7) 接通电源，使样品槽在负极端，用1-5v/cm的电压，电泳适当时间；
(8) 电泳结束后，可将含EB的凝胶直接放在紫外线检测仪上观察，并拍照记录，也可将不含EB的凝胶在0.5μg/ml的EB溶液中染色30-45分钟，再如上观察和拍照，记录结果。

聚丙烯酰胺凝胶电泳的步骤:
(1) 配制试剂
① 30%丙烯酰胺：100ml双蒸水中含29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺。
② 5×TBE　每升溶液含54g Tris.HCl，27.5g硼酸和20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)。
③ 10%过硫酸铵：10ml双蒸水中含1g过硫酸铵。

(2) 装置胶模　将玻璃板和垫条事先用去污剂刷洗，并经自来水和无离子水冲洗干净，晾干。装置时，将较大的玻璃板平放在工作台上，将两个垫条放在玻璃板两侧，涂上少量凡士林，并将上层玻璃板置于垫条上，用夹子将玻板连同垫条夹紧，底部用1%琼脂糖密封。为防止漏胶，除放梳子一边外，其余三边应用防水胶带密封。
(3) 根据玻璃板大小及夹层厚薄计算所需凝胶溶液量，按表配制溶液(100ml)。

将35μl TEMED加入100ml混合液中，混匀，然后均匀连续注入两玻璃板空隙中。

(4) 立即插入电泳梳，勿使梳齿下形成气泡。
(5) 室温聚合1小时，梳齿下出现折光带时，表明聚合反应已经完成。若凝胶不立即使用，可用纱布或滤纸(用1×TBE浸泡)包盖于凝胶顶部，置4℃保存1-2天。
(6) 拔去梳子，立即用水冲洗加样孔。
(7) 除去底部胶带，将凝胶直立放入电泳槽。在上下两槽中灌好1×TBE溶液，驱尽凝胶底部附着的气泡。并用1×TBE溶液冲洗加样孔；
(8) 将核酸样品与适量6×凝胶加样缓冲液(见表2-28)混合，并加入凝胶加样孔中；
(9) 接通电源，正极与下槽连接。电压一般控制在1.8v/cm。电压过高时凝胶产生的热量可造成DNA区带弯曲，甚至引起小DNA片段的解链；
(10) 电泳毕，取下玻板和凝胶，放在工作台上，从夹层一角轻撬，将上面的玻板轻轻移开，并小心揭下凝胶，置染色液中染色并进行结果观察。