产品简介：
聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)，其原理在于聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及 SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开，主要用于分离蛋白质和寡核苷酸。
NobleRyder SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制 SDS- PAGE 凝胶，也可配制非变性(native)PAGE 凝胶，30T 一般可以配制 30～40 块，具体配制的量应根据器具大小决定。
产品组成：
|
编号 名称 |
P0818 30T |
Storage |
|
试剂(A): 30% Acr -Bis(29:1) |
100ml |
4℃ 避光 |
|
试剂(B): 1.5M Tris-HCl(pH8.8) |
100ml |
RT |
|
试剂(C): 10% SDS |
5ml |
RT |
|
试剂(D): Ammonium Persulfate |
0.5g |
RT |
|
试剂(E): TEMED |
1.5ml |
4℃ 避光 |
|
试剂(F): 1M Tris-HCl(pH6.8) |
15ml |
RT |
|
使用说明书 |
1份 |
|
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制 10%过硫酸铵：直接在 0.5g Ammonium Persulfate 中加入 5ml 蒸馏水，充分溶解，分装成小份储存于-20℃或 4℃。
2、根据目的蛋白分子量大小选择合适的凝胶浓度，按照下面的表格配制 SDS-PAGE 的分离胶(下层胶)：
不同浓度的 SDS-PAGE 分离胶的最佳分离范围：
|
SDS-PAGE 分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
|
6%胶 |
50-150kD |
|
8%胶 |
30-90kD |
|
10%胶 |
20-80kD |
|
12%胶 |
12-60kD |
|
15%胶 |
10-40kD |
|
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml) |
|||||||
|
6%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
40 |
50 |
|
蒸馏水 |
2.6 |
5.3 |
7.9 |
10.6 |
13.2 |
15.9 |
21.2 |
26.5 |
|
30%Acr-Bis(29:1) |
1.0 |
2.0 |
3.0 |
4.0 |
5.0 |
6.0 |
8.0 |
10.0 |
|
1.5M Tris,pH8.8 |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
TEMED |
0.004 |
0.008 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
0.024 |
0.032 |
0.04 |
|
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml) |
|||||||
|
8%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
40 |
50 |
|
蒸馏水 |
2.3 |
4.6 |
6.9 |
9.3 |
11.5 |
13.9 |
18.5 |
23.2 |
|
30%Acr-Bis(29:1) |
1.3 |
2.7 |
4.0 |
5.3 |
6.7 |
8.0 |
10.7 |
13.3 |
|
1.5M Tris,pH8.8 |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
TEMED |
0.003 |
0.006 |
0.009 |
0.012 |
0.015 |
0.018 |
0.024 |
0.03 |
|
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml) |
|||||||
|
10%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
40 |
50 |
|
蒸馏水 |
1.9 |
4.0 |
5.9 |
7.9 |
9.9 |
11.9 |
15.9 |
19.8 |
|
30%Acr-Bis(29:1) |
1.7 |
3.3 |
5.0 |
6.7 |
8.3 |
10 |
13.3 |
16.7 |
|
1.5M Tris,pH8.8 |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
|
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml) |
|||||||
|
12%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
40 |
50 |
|
蒸馏水 |
1.7 |
3.3 |
4.9 |
6.6 |
8.2 |
9.9 |
13.2 |
16.5 |
|
30%Acr-Bis(29:1) |
2.0 |
4.0 |
6.0 |
8.0 |
10.0 |
12.0 |
16.0 |
20.0 |
|
1.5M Tris,pH8.8 |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
|
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(ml) |
|||||||
|
15%胶 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
40 |
50 |
|
蒸馏水 |
1.1 |
2.3 |
3.4 |
4.6 |
5.7 |
6.9 |
9.2 |
11.5 |
|
30%Acr-Bis(29:1) |
2.5 |
5 |
7.5 |
10 |
12.5 |
15.0 |
20.0 |
25.0 |
|
1.5M Tris,pH8.8 |
1.3 |
2.5 |
3.8 |
5.0 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
|
10%SDS |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
10%过硫酸铵 |
0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
|
TEMED |
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加 10%SDS 即可配制成非变性 PAGE 胶。
3、 按照如下表格配制 SDS-PAGE 的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)
|
成分 |
配制不同体积 SDS-PAGE 浓缩胶所需各成分的体积(ml) |
||||||
|
5%胶 |
1 |
2 |
3 |
4 |
6 |
8 |
10 |
|
蒸馏水 |
0.68 |
1.4 |
2.1 |
2.7 |
4.1 |
5.5 |
6.8 |
|
30%Acr -Bis(29:1) |
0.17 |
0.33 |
0.5 |
0.67 |
1.0 |
1.3 |
1.7 |
|
1M Tris,pH6.8 |
0.13 |
0.25 |
0.38 |
0.5 |
0.75 |
1.0 |
1.25 |
|
10%SDS |
0.01 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.06 |
0.08 |
0.1 |
|
10%过硫酸铵 |
0.01 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.06 |
0.08 |
0.1 |
|
TEMED |
0.001 |
0.002 |
0.003 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
注意事项：
1、 过硫酸铵配制成 10%溶液后应当-20℃保存。应尽量减少室温存放时间以防失效。有效避免失效的方法是分成小份， -20℃保存，用 2~3 次，剩余的弃用，亦可 4℃保存几天。
2、 TEMED 易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节 TEMED 的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
3、 配制聚丙烯凝胶的过程中，如果室温较低，可以置于 37℃放置，加速凝固。
4、 30%Acr-Bis(29:1)有轻微神经毒性，请小心操作。
5、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。