产品说明：
描述
通过细胞内染色检测细胞因子细胞内积累的最关键步骤是分离和激活细胞群以诱导目标细胞因了的产生。如果没有在蛋白质转运抑制剂存在下培养的适当活化的产生细胞因子的细胞，在大多数情况下检测细胞因子细胞内积累的能力会受到严重损害。已经报道了各种刺激细胞产生细胞因子的体外方法。多克隆激活剂对于诱导产生细胞因子的细胞特别有用。这些激活剂包括:刀豆球蛋白 A、脂多糖、佛波醇酶加钙离子载体或离子霉素、植物血凝素、肠毒素葡球菌 B和靶向 TCR/CD3 复合物亚基的单克隆抗体 (伴或不伴靶向共刺激受体的抗体，如 CD28)。
含有BD高尔基体的“白细胞活化混合物是一种即用型多克隆细胞活化混合物，含有佛波醇、PMA(佛波醇12-肉豆酸13-乙酸)、离子载体(离子素)和蛋白质转运抑制剂BD高尔基体m(Brefeldin A) 。该混合物可用于引发T细胞的初级细胞因子反应。使用这种混合物刺激细胞导致细胞因子的产生，该细胞因子位于产生细胞因子的细胞的粗糙内质网中细胞因子的这种定位是由蛋白质转运抑制剂成分Brefeldin A引起的，该成分阻断细胞内蛋白质转运过程。因此，细胞中细胞因子蛋白水平的增加通过免疫荧光染色和流式细胞术分析增强了产生细胞因子的细胞的可检测性。每个 100 L 样品瓶的内容物足以处理多达 50 mL 的细胞培养物 (~10^6 个细胞/mL) ;因此，可以刺激≥5 x 10^7 个细胞。
制备和储存
使用前将产品储存在-80°C 下或长期储存储备溶液。
推荐的检测程序
使用白细胞活化混合物的程序，BD高尔基体塞而: 在37”C的水浴中快速解冻混合物，每1mL细胞培养物加入2pL混合物(例如，~10^6个细胞/ mL) 并充分混合。将培养物置于 37°C 加湿的 CO2 培养箱中 4-6 小时。活化后，用FACS染色缓冲液(例如，BD PharmingenT"染色缓冲液，FBS，Cat.编号 554656) 用于抗体染色方案。用白细胞活化混合物处理刺激细胞4至6小时，BD GolgiPlug可显着提高通过免疫荧光染色检测产生细胞因子的细胞的能力。建议使用BD高尔基体塞的白细胞活化混合物在细胞培养物中保存的时间不要超过12小时。BD高尔基体对细胞内细胞因子染色具有不同的影响，即时间、激活剂和细胞因子依赖性，因此需要激活细胞超过4-6小时的时间可以由研究者根据经验确定