产品说明:
制备
将 FVS510 染料粉末和 260 μl 新鲜细胞培养级二甲基亚砜 (DMSO;例如 Sigma D2650) 置于室温下。加入 260 μl DMSO 并充分涡旋溶液。检查溶液并重复涡旋,直到染料储备液完全溶解。这是 Stock Solution。
存储
到达后,将干燥的染料干燥并避光储存在 -80°C 下直至使用。用 DMSO 复溶后,将储备液分小份储存在 -20°C 下。储存 90 天后请勿使用重组染料。用 DMSO 重构后 90 天后,请丢弃染料溶液。
细胞术要求
可以使用配备紫色激光的流式细胞仪(例如,BD FACSCanto™ II、BD LSRFortessa™ 或 BD™ LSR II)。这种染料可以从通常用于BD Horizon™ Brilliant Violet 510、BD Horizon™ V500或AmCyan的滤光片(例如525/50)中读出。最好使用目标细胞的样品进行荧光补偿。
Fixable Viability Stain 510 细胞标记
1. 使用不含叠氮化钠的缓冲液制备用于流式细胞术染色的细胞。
2. 用不含叠氮化钠和蛋白质的 Dulbecco 磷酸盐缓冲盐水 (1X DPBS) 洗涤细胞一次。
3. 以 1x10^6 个细胞/mL 的浓度重悬于不含叠氮化钠和蛋白质的 1X DPBS 中。
4. 每1 ml细胞悬液(1:1000)加入1 μl BD Horizon™ Fixable Viability Stain 510储备液,并立即涡旋。
a. 注意:我们建议滴定染料以获得最佳性能,因为不同的细胞类型和不同的应用会导致染色出现很大程度的可变性。
5. 将混合物在室温下避光孵育 15 分钟。
a. 可选:将细胞和染料混合物在 2-8°C 下孵育 30-60 分钟。或者,将混合物在 37°C 下孵育 5-7 分钟。
6. 用 2 ml BD Pharmingen™ 染色缓冲液 (FBS) 洗涤细胞两次(货号)。编号 554656) 或同等值。
7. 倒出上清液并轻轻混合以破坏细胞沉淀。
8. 在染色缓冲液 (FBS) 或等效物中重悬细胞。
9. 根据需要对细胞进行染色、固定和透化,以用于下游应用。
制备
将 FVS510 染料粉末和 260 μl 新鲜细胞培养级二甲基亚砜 (DMSO;例如 Sigma D2650) 置于室温下。加入 260 μl DMSO 并充分涡旋溶液。检查溶液并重复涡旋,直到染料储备液完全溶解。这是 Stock Solution。
存储
到达后,将干燥的染料干燥并避光储存在 -80°C 下直至使用。用 DMSO 复溶后,将储备液分小份储存在 -20°C 下。储存 90 天后请勿使用重组染料。用 DMSO 重构后 90 天后,请丢弃染料溶液。
细胞术要求
可以使用配备紫色激光的流式细胞仪(例如,BD FACSCanto™ II、BD LSRFortessa™ 或 BD™ LSR II)。这种染料可以从通常用于BD Horizon™ Brilliant Violet 510、BD Horizon™ V500或AmCyan的滤光片(例如525/50)中读出。最好使用目标细胞的样品进行荧光补偿。
Fixable Viability Stain 510 细胞标记
1. 使用不含叠氮化钠的缓冲液制备用于流式细胞术染色的细胞。
2. 用不含叠氮化钠和蛋白质的 Dulbecco 磷酸盐缓冲盐水 (1X DPBS) 洗涤细胞一次。
3. 以 1x10^6 个细胞/mL 的浓度重悬于不含叠氮化钠和蛋白质的 1X DPBS 中。
4. 每1 ml细胞悬液(1:1000)加入1 μl BD Horizon™ Fixable Viability Stain 510储备液,并立即涡旋。
a. 注意:我们建议滴定染料以获得最佳性能,因为不同的细胞类型和不同的应用会导致染色出现很大程度的可变性。
5. 将混合物在室温下避光孵育 15 分钟。
a. 可选:将细胞和染料混合物在 2-8°C 下孵育 30-60 分钟。或者,将混合物在 37°C 下孵育 5-7 分钟。
6. 用 2 ml BD Pharmingen™ 染色缓冲液 (FBS) 洗涤细胞两次(货号)。编号 554656) 或同等值。
7. 倒出上清液并轻轻混合以破坏细胞沉淀。
8. 在染色缓冲液 (FBS) 或等效物中重悬细胞。
9. 根据需要对细胞进行染色、固定和透化,以用于下游应用。