准备和存储
避免产品多次冻融。产品应在 -20°C 下未稀释保存以长期储存，也可在 4°C 下未稀释保存以短期储存。
推荐的实验流程
对活细胞进行染色，以便通过流式细胞术进行活力分析
1. 获得单细胞悬液。
2. 在 BD Pharmingen™ 染色缓冲液 （FBS） 中重悬细胞（货号.编号 554656） 或 1× 含有 0.05-0.2 μg/mL DAPI 的 Dulbecco 磷酸盐缓冲盐水 （DPBS）。
a. 用于活力分析的 DAPI 的最佳浓度可能因细胞类型而异。我们建议在早期实验中针对您感兴趣的细胞类型滴定试剂。
b. 此外，凋亡细胞可以用不同量的 DAPI 染色。我们建议使用 BD Pharmingen™ FITC Annexin V（货号否 556419） 如果需要进一步分析凋亡细胞。
3. 在室温下孵育 5 分钟。分析前无需清洗。
4. 继续通过流式细胞术进行分析。
通过流式细胞术对固定细胞进行染色以进行 DNA 含量分析
1. 获得单细胞悬液。
2. 用 70-80% 冰冷的乙醇在冰上处理细胞 30 分钟。
a. 乙醇固定通常提供最分辨的直方图。然而，该试剂也已成功用于 Transcription Factor Buffer Set（货号.编号 562574/ 562725） 或 BD Cytofix™ 固定缓冲液（货号编号 554655） 和 BD Phosflow™ Perm 缓冲液 III（货号No. 558050） 协议。
3. 用 BD Pharmingen™ 染色缓冲液 （FBS） 洗涤细胞一次。
4. 使用前，立即在染色缓冲液 （FBS） 或 1× DPBS 中将 DAPI 溶液稀释至 0.5-1 μg/mL。
5. 以 1 - 2 x 10^6 个细胞/mL 的细胞密度对细胞进行 5-15 分钟的染色。分析前无需进一步清洗。
a. 用于 DNA 含量分析的最佳细胞密度和 DAPI 浓度可能因细胞类型而异。应在早期实验中优化检测条件以获得最佳结果。
6. 继续通过流式细胞术进行分析。
用于细胞核可视化的固定细胞的免疫荧光染色
1. 根据需要固定和透化细胞。
2. 使用前立即在 1× DPBS 中将 DAPI 溶液稀释至 1 μg/ml。
3. 在分析前至少 15 分钟向每个样品中添加 DAPI 溶液。
4. 进行成像。