色氨酸2-单加氧酶活性测定试剂盒（比色法）
Tryptophan 2-Monooxygenase Assay Kit
目录号：53AML003
产品及特点
色氨酸2-单加氧酶（Tryptophan 2-Monooxygenase，EC1.13.12.3，CAS:37256-65-8）是一种与FAD结合的黄素酶，本产品是用于检测色氨酸2-单加氧酶（TMO）活性的试剂盒。其原理是使用分子氧作为共底物催化L-色氨酸的氧化脱羧，从而产生吲哚-3-乙酰胺（IAM）和二氧化碳。随后，IAM在酸性条件下与铁氰化钾反应生成粉红色复合物，在530 nm处有特征光吸收，在530 nm处测定吸光度（OD值），TMO活性与OD值正相关。本产品有如下特点：
1.即开即用，使用便捷，用户不需要优化条件，只需准备待测样本。
2.最低检测限为XXX U，线性范围XXX U-XXX U。
3.本试剂盒1个酶活性单位的定义是在37℃ pH 7.0-7.5的条件下，每分钟能催化1 μmol吲哚-3-乙酰胺（IAM）所需的酶量。
4.本产品足够100次1 mL体系的比色皿检测或400次250 μL体系的96孔板检测。
5.本产品只可用于科研。
规格及充分
本产品使用塑料袋包装
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成分 |
编号 |
规格 |
包装 |
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TMO活性测定底物干粉 |
53AML003s |
100 T |
60 mL本色瓶 |
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TMO活性测定显色液 |
53AML003c |
50 mL |
50 mL棕色瓶 |
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TMO活性测定反应液 |
53AML003r |
40 mL |
60 mL本色瓶 |
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10 mM L-色氨酸溶液 |
53AML003 |
1 mL |
1.5 mL本色管 |
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使用手册 |
53AML003sc |
1份 |
无 |
运输及保存
低温运输，2-8℃保存，有效期一年。
自备物品
待测样本、样本缓冲液、分光光度计，1 mL比色皿
使用方法
一、首次使用本试剂盒时配制下列溶液
1.配制TMO活性测定底物液：将40 mL TMO活性测定反应液加入到装有TMO活性测定底物干粉的瓶中，颠倒摇晃20次溶解，得TMO活性测定底物液。
二、待测样本的制备
2.用自选方式制备待测样本，样本溶于水或缓冲液中，缓冲液pH值控制为7.0-7.5。
标准曲线梯度稀释液的制备
3.标准曲线只需做一次，计算得到回归方程即可，下面以5个稀释度的标准曲线为例。
4.标记1-5个1.5 mL离心管。
5.分别向1-5号管中加入1、0.8、0.6、0.4、0.2 mL的10 mM L-色氨酸溶液，用超纯水补体积至1 mL，得10、8、6、4、2 mM的L-色氨酸梯度稀释液。
三、用光径1 cm的比色皿测定光吸收
6.标记N+6个1.5 mL的塑料离心管，其中N个用于待测样品，1个用于阴性对照，5个用于标曲。
7.按下表加入各成分：
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成分 |
N个样本管 |
阴性对照 |
5个标曲管 |
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超纯水 |
90 μL |
100 μL |
不加 |
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样本酶液 |
10 μL |
不加 |
不加 |
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各梯度的L-色氨酸溶液 |
不加 |
不加 |
各100 μL |
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TMO活性测定底物液 |
400 μL |
400 μL |
400 μL |
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混合均匀37℃保温30 min，避光 |
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TMO活性测定显色液 |
500 μL |
500 μL |
各500 μL |
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混合均匀10 min避光 |
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8.冷却到室温后迅速用分光光度计在530 nm测定OD，测前用蒸馏水调零。
9.得到的OD分别减去阴性对照的OD即得N个样本的OD和5个标准曲线样本的OD。
四、数据分析
10.以L-色氨酸浓度为横轴，以OD530为纵轴，以1-5号L-色氨酸标准曲线样本的数据用excel绘制标准曲线并得到计算公式。
11.根据计算公式，用N个样本的OD530数据计算出其所对应的L-色氨酸浓度。根据TMO活性的定义（每分钟催化1 μmol吲哚-3-乙酰胺（IAM）所需要的酶量为1个单位）计算出酶的活性。
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