Tissue/Cell RNA/DNA Mini Kit
动物组织/细胞 RNA/ DNA 共提试剂盒
（免氯仿）
目录号：91219
产品内容
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产品成份 |
91219-50（50 次） |
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裂解液 MRL Plus |
50 ml |
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去蛋白液 RW1 |
40 ml |
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漂洗液 RW |
10 ml（需加入指定量无水乙醇） |
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RNase-Free ddH2O |
5 ml |
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70%乙醇 |
9 ml（需加入指定量无水乙醇） |
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抑制物去除液 IR |
25 ml |
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漂洗液 WB |
13 ml（需加入指定量无水乙醇） |
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洗脱缓冲液 EB |
10 ml |
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gDNA 吸附柱和收集管 |
50 套 |
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RNA 吸附柱和收集管 |
50 套 |
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RNase-Free 1.5ml 离心管 |
50 支 |
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RNase-Free 2.0ml 液氮研磨管 |
50 支 |
自备试剂
无水乙醇
保存条件
室温（15 ~ 25℃）
产品简介
Tissue/Cell RNA/DNA Mini Kit（免氯仿）适用于从各种动物组织、细胞中同时提取出总 RNA 和基因组 DNA，提取全程不需要使用氯仿，得到包含总 RNA，不需要DNase I消化，可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、芯片、测序等。基因组 DNA 也可以直接用于下游的 Southern、酶切、PCR 等各种试验。
独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNase/DNase，然后裂解混合物RNA/DNA同时通过一个gDNA吸附柱，基因组DNA被吸附而RNA穿透滤过。gDNA 吸附柱上的基因组DNA经过一系列漂洗、洗脱后得到纯净基因组DNA。滤过的总RNA，先用乙醇调节结合条件，然后转入RNA吸附柱，在高离序盐状态下选择性吸附于RNA吸附柱上，接着通过一系列快速的离心-漂洗-离心-洗脱，得到纯净的总RNA。
注意事项
1. 采集 RNA 样本时，把新鲜组织样本浸入 RNAsafe (RNA 样品保存液，91115-100) 中，可在37℃保存一天，在25℃保存一周，在 4℃保存一个月，在-20℃或者–80℃长期保存。
2. 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。
3. 提取时，RNA 在裂解液 MRL Plus 中时不会被 RNase 降解，但后续处理过程中应使用不含RNase的吸头和器皿。
4. 样品在加入裂解液 MRL Plus 并匀浆后，可在–80℃保存一个月以上。
5. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在 37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
重要提示：
① 第一次使用前, 请先在漂洗液 RW 、70%乙醇、漂洗液 WB 瓶中加入
指定量无水乙醇，详见瓶上的标签。
② 所有离心步骤均需要在室温（15~25℃）下进行，提取效果更佳！
操作步骤
1. 动物组织：
a．电动匀浆：取新鲜组织10~20 mg加入 500μl裂解液MRL Plus，电动匀浆，直到无明显组织块即可。
b．液氮研磨：液氮研磨组织成细粉，取10~20 mg组织细粉加入500μl 裂解液 MRL Plus，剧烈涡旋振荡，直到无明显粉末团即可。
c． 将裂解物 13,000 rpm 离心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。
d．下接操作步骤 3。
2. 细胞
a. 悬浮细胞：离心收集细胞，加入500μl裂解液 MRL Plus（<8x106细胞）, 吹打混匀，剧烈涡旋振荡20sec，充分裂解。
b. 贴壁细胞：不需要消化，吸弃培养基后，直接在培养皿/板中加裂解液MRL Plus（每<8x106细胞加500μl裂解液MRL Plus）进行消化、裂解；或者，先用胰酶消化后离心收集细胞，然后加入裂解液MRL Plus，吹打混匀，剧烈涡旋振荡20sec，充分裂解。
c. 下接操作步骤 3。
3. 将裂解匀浆物（或离心得到的上清）全部加入gDNA吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm离心1min，基因组DNA被吸附在膜上，保留滤液（RNA 在滤液中）。把 gDNA 吸附柱放入2.0 ml离心管，置于4℃度，以备提取DNA用。
以下是总RNA的提取步骤：
4. 向滤液中加入等体积的70%乙醇，用移液器吹打混匀。
5. 每次转移≤750μl滤液混合物至RNA吸附柱中，13,000 rpm离心1min，此时，RNA 被吸附在膜上，倒弃滤液。
6. 加入700μl去蛋白液RW1，室温放置1min,13,000rpm离心30sec，倒弃滤液。
7. 加入500μl漂洗液RW（检查是否已加入乙醇），13,000 rpm离30sec，倒弃滤液。
8. 重复步骤 7。
9. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心2min，除去膜上残留的乙醇。
10. 取出RNA吸附柱，放入RNase-free 1.5 ml离心管中，向RNA吸附膜的中央部位悬空滴加30~50μl 的RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心1min，管底即总 RNA。
11. 得到RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
以下是 DNA 的提取步骤：
12. 向步骤3的gDNA吸附柱中，加入500μl抑制物去除液IR，12,000 rpm离心30sec，倒弃滤液。
13. 加入700μl漂洗液WB（检查是否已加入乙醇），12,000 rpm离心30sec，倒弃滤液。
14. 加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30sec，倒弃滤液。
15. 将 DNA 吸附柱放回空收集管中，13,000rpm 离心2 min，甩干吸附膜上残留的乙醇。
16. 取出 gDNA 吸附柱，放入新的 1.5 ml 的离心管中，向吸附膜的中央悬空滴加100μl 洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65~70℃水浴中预热效果更好），室温放置 3~5 min，12,000rpm离心1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2min，12,000 rpm离心1 min。
17. 得到的DNA可以存放在2~8℃，如果要长时间存放，可以放置在- 20℃。
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