DNA退火缓冲液(5×)
产品简介:
DNA寡核苷酸退火缓冲液(Annealing Buffer for DNA Oligos)简称为DNA退火缓冲液,是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液,可用于常规的DNA oligo的退火,尤其适合于较难退火的用于RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。由于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,自身易形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。
NobleRyder Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接,转化后可以得到大量的阳性克隆。该本试剂操作简单,只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)按照一定比例混合后,置于PCR仪上进行程序降温,约90min即可完成。
产品组成:
编号 名称 |
N6822 |
Storage |
试剂(A): Annealing Buffer for DNA Oligos(5×) |
1ml |
-20℃ |
试剂(B): Nuclease-Free Water |
5ml |
RT |
使用说明书 |
1份 |
操作步骤(仅供参考):
1、 把待退火的DNA oligo用经灭菌的超纯水或Nuclease-Free Water配制成50μM,同时溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5×),混匀备用
2、 按如下退火反应体系操作:
N uclease-Free Water |
40μl |
Annealing Buffer for DNA Oligos(5×) |
20μl |
DNA oligo A(50μM) |
20μl |
DNA oligo B(50μM) |
20μl |
Tatal |
100μl |
按照上述顺序,依次加入并混匀,如果所用PCR仪没有加热盖,可加入Mineral Oil防止液体挥发。
3、 按如下PCR仪的退火条件:
步骤 |
温度 |
时间 |
作用 |
1 |
95℃ |
2min |
Oligo充分变性 |
2 |
每90s下降1℃,降至25℃ |
约90min |
程序退火 |
3 |
4℃ |
长期保存 |
暂时存放 |
4、退火后可直接用于连接反应,也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,最好用纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%,以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
注意事项:
1.避免反复冻融,以免效率下降。
2.该试剂只适合于DNA oligo的退火,不适用于RNA oligo 的退火。
3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期: 12个月有效。