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DNA退火缓冲液(5×) 
 
产品编号: N6822  CAS号:  
分子式:   分子量:  
EINECS编号:  
DNA退火缓冲液(5×)
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DNA退火缓冲液(5×)

产品简介:

DNA寡核苷酸退火缓冲液(Annealing Buffer for DNA Oligos)简称为DNA退火缓冲液,是一种可用于DNA oligo退火的缓冲液,可用于常规的DNA oligo的退火,尤其适合于较难退火的用于RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。由于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列,自身易形成发夹结构,从而影响两条DNA oligo的正确退火。

NobleRyder Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)能有效避免DNA oligo自身形成发夹结构,并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接,转化后可以得到大量的阳性克隆。该本试剂操作简单,只需把待退火的DNA oligoAnnealing Buffer for DNA Oligos(5×)按照一定比例混合后,置于PCR仪上进行程序降温,约90min即可完成。

 

产品组成:

                                    编号

名称

N6822

Storage

试剂(A): Annealing Buffer for DNA Oligos(5×)

1ml

-20℃

试剂(B): Nuclease-Free Water

5ml

RT

使用说明书

1份

 

操作步骤(仅供参考)

1、 把待退火的DNA oligo用经灭菌的超纯水或Nuclease-Free Water配制成50μM,同时溶解Annealing Buffer for DNA Oligos(5×),混匀备用

2、 按如下退火反应体系操作:

   N uclease-Free Water

40μl

    Annealing Buffer for DNA        Oligos(5×)

20μl

DNA oligo A(50μM)

20μl

DNA oligo B(50μM)

20μl

Tatal

100μl

按照上述顺序,依次加入并混匀,如果所用PCR仪没有加热盖,可加入Mineral Oil防止液体挥发。

3、 按如下PCR仪的退火条件:

 

步骤

温度

时间

作用

1

95℃

2min

Oligo充分变性

2

每90s下降1℃,降至25℃

约90min

程序退火

3

4℃

长期保存

暂时存放

 

4、退火后可直接用于连接反应,也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应,最好用纯化试剂盒进行纯化,或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%,以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。

 

注意事项:

1.避免反复冻融,以免效率下降。

2.该试剂只适合于DNA oligo的退火,不适用于RNA oligo 的退火。

3.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

有效期: 12个月有效。