产品简介：

TRIpure 是广谱型总RNA提取试剂。实验操作快速方便，颜色鲜明，便于分层。本试剂适用范围广泛，可以从动物组织、 植物材料、 各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。 该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×10⁶)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>10⁷)均有较好的分离效果。样品在TRIpure中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，RNA 分布在上清层中。收集上清层后，经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好，无蛋白和DNA污染，可用于各种分子生物学常规实验，如RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、体外翻译等。

TRIpure 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色，可见许多介于7kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分)，两条优势核糖体~5 kb(28S)和~2 kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间 (tRNA, 5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通琼脂糖凝胶电泳，28S的位置大约在2kb，18S大约在1kb的位置，不同浓度的凝胶位置变化较大。

试剂盒组成、储存、稳定性：

重要提示：

本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。

RNA抽提操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：用TRIpure 抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无特殊说明，所有的操作应该在在15~30°C的室温条件下。

1）匀浆

a：植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIpure中迅速研磨，每50-100mg组织加入1ml TRIpure，混匀。注意：样品体积一般不要超过TRIpure体积的10%。 

b：动物组织：取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎，每30-100mg组织加入1ml TRIpure，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIpure 1ml混匀。注意：样品体积一般不要超过TRIpure体积的10%。
 C：单层培养细胞：尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm的培养板中加入1ml 的TRIpure覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIpure量（每10cm²加1ml）。当TRIpure量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。注意：贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶（皿）脱落，这并不意味着裂解不完全，此时细胞膜实际已经完全破裂开，并已释放出全部RNA，继续做即可。
 d：细胞悬液：离心收集细胞。在TRIpure试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×10⁶的动物细胞，植物或酵母菌细胞或每1×10⁷细菌加1ml的TRIpure。在加入TRIpure前应避免洗涤细胞，因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。

2） 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。

3） 可选步骤： 在4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟，取上清。

如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或肌肉，植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜，多糖，以及高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织的样品时，上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。

4） 每1ml TRIpure加0.2ml氯仿。盖紧管盖，剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2~3分钟。

5）在4°C 12,000 rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层：下层红色有机苯酚氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIpure 容量的50-60%。 （有机层和中间层是蛋白和DNA，如果需要提取，请联系我们索取提取方法）。

6）将水样层转移到一干净的离心管中，加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10分钟。

RNA沉淀在离心前通常不可见，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。

7）在室温或者4°C 12,000 rpm 离心10分钟，弃上清。

8）加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用1mlTRIpure用1ml75%乙醇对沉淀进行洗涤。

9）在室温或者4°C 12,000 rpm离心3分钟，弃上清，注意不要丢失RNA沉淀。

注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。

10）室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl RNase free water，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。

储存事项：

TRIpure在室温下能稳定保存12个月。尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在2~8°C的环境下。

注意事项：

1）样品用TRIpure匀浆后，如果不即刻加入氯仿之前，置于-70°C下可放置一个月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。

2）若下游实验对DNA非常敏感，建议用 RNase free DNase I对RNA进行处理。

3）自备试剂：氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、 RNase free water或者DEPC处理过的水。

4）本公司生产TRIpure Reagent质量优异，可以完美替代Invitrogen的Trizol Reagent。提取质量和下游实验完全一样。