产品说明：

特征

仅需 20 分钟即可完成 cDNA 合成和 gDNA 去除

即使来自低丰度转录本也能获得高 cDNA 产量

从转录本的 5' 和 3' 区域合成 cDNA

无需设计RNA特异性引物或探针

产品详情

du特的QuantiTect逆转录试剂盒通过集成的基因组DNA去除为cDNA合成提供了快速便捷的程序。gDNA清除缓冲液可有效消除RNA样品中的基因组DNA污染。QuantiTect逆转录试剂盒提供了快速高效逆转录所需的所有组件，包括定量逆转录酶、定量逆转录缓冲液和du特的RT引物混合物。合成的cDNA经过优化，可用于实时荧光定量PCR，可以可靠地定量来自mRNA转录本所有区域的靶标。

Performance

使用 QuantiTect 逆转录试剂盒，使用du特的 gDNA 擦除缓冲液可有效、快速地去除 RNA 样品中污染的基因组 DNA。消除基因组DNA对于准确的基因表达结果至关重要，RNA特异性引物或探针的设计并不总是可行的。使用gDNA清除缓冲液可以节省时间并降低成本，因为在RNA样品纯化期间或之后都不需要单独的DNase消化。

定量逆转录酶的高RNA亲和力与定量逆转录缓冲液相结合，可从任何RNA模板获得高产量的cDNA。即使是困难的模板，例如GC含量高或二级结构复杂的模板，也能成功逆转录。

使用不同量的起始RNA对IL12A和IL1RN进行实时两步RT-PCR分析。使用QuantiTect逆转录试剂盒或供应商AII的试剂盒对总RNA进行逆转录。在ABI PRISM 7900上使用QuantiTect探针PCR试剂盒和QuantiTect基因表达检测对IL12A或IL1RN进行分析。QIAGEN试剂盒的CT值较低，特别是对于中等丰度的IL12A基因（粗体），表明cDNA产量较高。N.D.：未检测到。

RT引物混合物包含专门优化的寡核苷酸dT和随机引物混合物，可从RNA转录本的所有区域合成cDNA，甚至来自5'区域。与其他供应商的试剂盒相比，QuantiTect逆转录试剂盒为实时PCR分析提供了高产量的cDNA模板，无论扩增的靶区位于转录本上的哪个位置，并且在检测低丰度基因方面具有更高的灵敏度。QuantiTect 逆转录试剂盒还可以提高实时 RT-PCR 的重现性。

Principle

QuantiTect逆转录酶是Omniscript和Sensiscript逆转录酶的新型混合物，对RNA具有高亲和力，能够从广泛的RNA量（10 pg至1μg）合成cDNA。与其他供应商的试剂盒相比，QuantiTect 逆转录试剂盒可提供高产量的 cDNA 模板，用于实时 PCR 分析，无论扩增的靶区位于转录本上的哪个位置。即使是困难的模板，50T例如GC含量高或二级结构复杂的模板，也能成功逆转录。QuantiTect RT缓冲液也经过优化，可与实时荧光定量PCR缓冲液兼容。

为了在实时RT-PCR基因表达测定中获得准确的结果，重要的是只扩增和检测cDNA。通过设计跨越外显子/外显子边界的引物或探针，可以避免基因组DNA的干扰。然而，在不可能的情况下（例如，cDNA来自单外显子基因），起始RNA样品必须不含基因组DNA。使用 QuantiTect 逆转录试剂盒，使用du特的 gDNA 擦除缓冲液可有效、快速地去除 RNA 样品中污染的基因组 DNA。节省时间并降低成本，因为在RNA样品纯化期间或之后都不需要单独的DNase消化。此外，无需设计RNA特异性引物或探针。

Procedure

使用QuantiTect逆转录试剂盒，基因组DNA去除和cDNA合成仅需20分钟。该过程快速方便，因为两种反应都使用相同的孵育温度运行，并使用预混液进行设置。

QuantiTect 逆转录试剂盒包括快速 cDNA 合成所需的一切。纯化的RNA在gDNA清除缓冲液中短暂孵育，以有效去除污染的基因组DNA。与其他方法相比，RNA样品直接用于逆转录，使用由Quantiscript逆转录酶，Quantiscript RT缓冲液和RT引物混合物制备的预混液。使用Quantiscript逆转录酶，RNA可以在低温下转录，甚至可以通过复杂的2°结构转录，确保RNA保持完整 - 整个反应在42°C下进行，然后在95°C下失活。 无需进行 RNA 变性、引物退火和 RNase H 酶切的其他步骤。

Applications

QuantiTect逆转录试剂盒允许对所有类型的起始材料进行高效、灵敏的实时RT-PCR，包括激光显微解剖样品和组织活检。