产品说明：

 特征

l  克服福尔马林交联的新方法

l 在不影响完整性的情况下高效释放RNA

l  简化的方案可在 85 分钟内提供 RNA

 产品详情

RNeasy FFPE 试剂盒专为从福尔马林固定的石蜡包埋组织切片中纯化总 RNA 而设计。特殊的裂解和孵育条件逆转了RNA的甲醛修饰。此外，裂解缓冲液可有效从组织切片中释放RNA，同时避免RNA进一步降解。该试剂盒还使用 DNase 和 DNase 增强缓冲液来优化去除基因组 DNA 污染。RNeasy MinElute离心柱能够以低至10 μl的洗脱体积纯化总RNA。纯化可以在QIAcube Connect上完全自动化。

 Performance

使用RNeasy FFPE试剂盒，从固定和包埋样品中纯化的RNA产量高于使用其他方法获得的RNA。回收的RNA在70个核苷酸的长度下是完整的，并且几乎没有基因组DNA污染。使用该试剂盒从FFPE样品中纯化的可用RNA片段非常适合用于敏感的下游应用，包括实时RT-PCR

 Principle

用福尔马林固定组织会导致RNA-RNA和RNA-蛋白质交联，从而损害RNA在酶测定中的性能。固定和包埋条件也会导致FFPE样品中核酸严重碎片化。RNeasy FFPE 试剂盒使用特殊的裂解和孵育条件来逆转 RNA 的甲醛修饰。裂解缓冲液可有效释放FFPE组织样品中的RNA，防止RNA进一步降解。这些优化的条件允许纯化所有可用的RNA，从而使RNeasy FFPE试剂盒的FFPE样品比其他方法更高的产量。

 Procedure

整个RNeasy FFPE程序可以在短短85分钟内完成。蛋白酶 K 酶解的样品裂解仅需 15 分钟。裂解后，将样品在80ºC下孵育15分钟。然后，DNase处理可有效去除基因组DNA，包括小DNA片段。最后，使用RNeasy MinElute离心柱纯化浓缩的RNA，并以14-30μl的体积洗脱。纯化可以在QIAcube上完全自动化。

 Applications

RNeasy FFPE 试剂盒可从 FFPE 样品中分离出长度超过 70 个核苷酸的所有 RNA 分子，为包括 RT-PCR 在内的众多下游应用提供可用的 RNA 片段。然而，从FFPE样品中纯化的RNA是严重片段化的，不应用于需要全长RNA的下游应用。某些应用可能需要修改以允许使用片段化的RNA（例如，设计用于RT-PCR的小扩增子）。对于cDNA合成，应使用随机或基因特异性引物代替寡核苷酸dT引物。