FlashPure sgRNA Purification Kit

高效 sgRNA 纯化试剂盒

目录号:91614

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃）

产品简介

本试剂盒是一款快速可靠的 sgRNA 专用的纯化试剂盒，可体外转录（IVT）酶促反应中纯化多达 200 μg 浓缩的高质量 RNA。独特设计的微量 sgRNA 纯化柱，可确保零缓冲液残留，无交叉污染，洗脱体积低至 6μl。

在高盐条件下，RNA 与硅胶吸附膜高效、专一地结合，经过漂洗步骤，最后 RNA 被 RNase-Free H2O洗脱下来，最大限度地去除了不需要的 NTP、蛋白质、无机盐离子和许多有机杂质等，确保在 IVT/RNA 合成反应后获得高纯度的 RNA 转录本。洗脱后的 RNA 可用于多种下游应用，包括 RT-PCR、NGS、RNA 文库制备、Northern blot、Formation of ribonucleoprotein (RNP) complexes for genome editing、显微注射、RNA标记、 RNA 干扰、转染等下游实验。

本试剂盒不但可以纯化 miRNA 等各种小的 RNA，也可以纯化大片段的 mRNA 等 RNA。还适用于从酶反应液（如 DNase 处理、体外转录、RNA 加帽、蛋白酶处理、RNA 标记等）中纯化回收 RNA，也可用于

从其它方式提取获得的 RNA 的纯化。

适用范围

适用于回收≥15nt 的单链 RNA 或者双链 RNA。

产品特点

1. 快速：步骤少，操作简便，整个操作仅需 15 分钟。

2. 高效：独特配方使本产品比一般试剂盒回收效率大大提高，并且不会抑制下游反应。

注意事项

1. 使用前请检查 Buffer MRC 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

2. 所有步骤均可以在室温进行，但是应该迅速操作，减少 RNA 降解机会。

3. Wash Solution 1 和 Wash Solution 2/3 加入无水乙醇后，可以在常温保存。

4. Wash Solution 2/3 可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体，并不影响使用，不吸晶体，直接吸上清使用就可以。

操作步骤

提示：

第一次使用前请先在 Wash Solution 1 瓶和 Wash Solution 2/3 瓶中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签，并打对勾标记。

1. 于冰上，用 RNase-Free H2O 将 RNA 样品补足至 100 μl，加入 200 μl Buffer MRC，轻柔混匀。

2. 加入 375 μl （1.25 倍体积）无水乙醇，混匀，无需离心。

注意：如果希望回收大于 25nt 的 RNA，加 1.25 倍体积无水乙醇就可以；

如果希望回收大于 15nt 的 RNA，可以加 2 倍体积无水乙醇。

3. 将上一步所得溶液加入一套吸附柱中（吸附柱套在收集管内），13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液，将吸附柱重新套回收集管。（吸附柱的最大容量是 700 ul，溶液较多时，可分两次进行）

4. 加入 700 μl Wash Solution 1（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。

5. 漂洗：加入 500ul Wash Solution 2/3，13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。

6. 二次漂洗：重复步骤 5 一次。

7. 干燥：将离心吸附柱于 13,000 rpm 离心 2 min，甩干残留漂洗液。

8. 洗脱：将吸附柱置于一个新的 1.5 ml 离心管中，在吸附膜的中央悬空滴加 10 ~ 20 μl RNase-Free H2O，室温放置 2 min，13,000 rpm 离心 1 min，收集 RNA 片段。

注意：为增加回收效率，可将 RNase-Free H₂O 在 80℃预热，也可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置 2 min，再次离心收集。

减少洗脱液（RNase-Free H₂O）的体积可以提高 RNA 浓度，但是最低洗脱液体积不应少于 6μl。