平末端DNA加A试剂盒
目录号:42016
试剂盒组成、储存、稳定性:
组成 |
25次(42016-25) |
50次(42016-50) |
Taq DNA polymerase |
25ml |
50ml |
10 x A-tailing buffer |
25ml |
50ml |
dATP Mix |
25ml |
50ml |
储存:-20 ℃ 保存。
产品介绍:
由Pfu、HiFi、Vent或KOD等有3’→5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带A尾的平末端DNA片段,如该平末端DNA片段需要和T载体相连接,需要先利用Taq DNA polymerase在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接。本试剂盒提供了加A尾需要的所有成分,可以在20分钟左右完成整个过程。
操作步骤:
1. 平末端PCR产物用PCR清洁(无非特异扩增)或者胶回收纯化(有非特异扩增)。
2. 纯化好的平末端DNA片段按以下反应体系加A尾:
平末端DNA片段 |
1-7ml(不超过1mg) |
dATP Mix |
1ml |
10 x A-tailing buffer |
1ml |
Taq DNA polymerase |
1ml |
3. 轻轻混匀后72℃保温20-30 分钟。
4. 加A尾的产物可以不需要再次清洁或者胶回收纯化,取1-2ml直接用于连接反应。