DNA Quick Ligation Kit
目录号：42110
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目录编号 |
包装单位 |
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42110-20 |
20次 |
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42110-60 |
60次 |
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Components |
42110-20 |
42110-60 |
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2 xQuick Ligation Buffer |
100 ml |
300 ml |
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T4 DNA ligase, 5 U/ml |
100 U |
300 U |
产品储存：-20°C 保存，避免反复冻融次数过多。
制品说明：本试剂盒可在室温(22°C) 10分钟条件下，迅速完成DNA 片段粘端或平端连接反应。连接产物可直接转化。可用于DNA 片段克隆，文库构建，TA克隆，Linker连接等。
特点：快速、简单、粘端平端均可以在10分钟内完成连接反应。
操作步骤：
1. {C}反应按以下体系进行：
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5 ml |
2 xQuick Ligation Buffer |
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ml |
Vector DNA(30-60ng） |
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ml |
Insert DNA（载体摩尔数量的3倍量，插入和载体摩尔比为3:1） |
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ml |
无菌水 |
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1 ml（5 Weiss Units/ml) |
T4 DNA Ligase |
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Final Volume |
10ml |
一般最后加入T4 DNA Ligase， 充分混匀，可瞬间离心收集液体至管底。
2. {C}22°C连接10分钟（一般可在PCR仪器完成）。
通常推荐22°C连接5-10分钟 ，>3kb长片段连接可以延长至30分钟。不推荐超过30分钟，超过可能降低转化子数量。
3. {C}冰上冷却，然后直接转化或贮存于-20°C
如储存于-20°C，转化前应该置冰上重新溶解，充分混匀后进行转化。
说明：
1. {C}转化前不要热灭活T4 DNA ligase，否则将降低转化效率。
2. {C}DNA片段体积大于4 ml的，可增加2 xQuick Ligation Buffer，总反应体积相应可以增至20 ml，这样在连接体系中可加入更大体积的DNA片段。