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《原理图》
细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下，任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如，体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而，在抑癌基因p53出现问题时，凋亡就不会诱导发生，从而导致癌细胞的不断增长。细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种Ca离子依赖性磷脂结合蛋白，可以与磷脂酰丝氨酸特异结合。用绿色荧光FITC标记的Annexin V通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料，PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜，因此Annexin V和PI结合使用，可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。《所需的设备和材料》- 样品和诱导剂- PBS、去离子水- 合适量程的移液器- 细胞培养用6，12，24，96孔板- 流式细胞仪或荧光显微镜。* 最大激发/发射波长 Annexin V, FITC: 494 nm/518 nm；PI: 535 nm/617 nm《溶液制备》1×Annexin V Binding solution：将10×Annexin V Binding Buffer用超纯水稀释10倍。《稳定性》试剂盒在0-5℃下可以保存6个月，请避光保存Annexin V, FITC结合物。《储存条件》0-5℃，避光 (切勿冻存)《运输条件》室温 ＊实验实例及操作步骤请参考中文说明书《参考文献》1) Casciola-Rosen L, Rosen A, Petri M, Schlissel M, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93(4)1624.2) van Engeland M, Ramaekers FC, Schutte B, Reutelingsperger CP, Cytometry, 1996, 24(2), 131.
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