在所有的钙离子指示剂中，Rhod 2荧光信号的波长最长。它具有和罗丹明类似的激发和发射波长，分别为557 nm和581 nm。这样的激发波长使得我们很容易就能找到氩和氪光源的激光。尽管有人认为Rhod 2的荧光信号仅仅将钙复合物的荧光增加了数倍，但是Dojindo的Rhod 2由于具有很高的纯度，能有效地将钙荧光信号增加80-100倍左右，使得它的信号强度在所有的钙离子探针里面是最强的。所以，我们强烈建议使用Rhod 2作为探针用激光显微镜来检测细胞内的钙离子情况。有报道称，特别是在神经组织切片培养方面，Rhod 2具有定位点的轮廓线更加清晰的特点。Rhod 2和钙离子的解离常数为（Kd＝ 1.0 mM ），在所有的钙离子荧光探针中是最高的，为监测钙离子浓度提供了一个广阔的范围。Rhod 2-AM是一种Rhod 2的乙酰甲酯衍生物，能非常容易的通过AM法负载到细胞内。
操作说明(for Human T cells)*
试剂:
Pluronic F127
Hanks' balanced salt solution (HBSS)
HEPES buffer saline (
操作:
1. 向Rhod 2-AM/DMSO溶液中加入16.5 mg Pluronic F127，Pluronic F127可以防止Rhod 2-AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。
2. 用HBSS稀释Rhod 2-AM溶液，制备4 µM的Rhod 2-AM working solution。
3. 将Rhod 2-AM working solution加入细胞，在
4. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
5. 用HEPES buffer saline洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1x105 cells/ml的溶液。
6.
7. 激发波长和发射波长分别为557nm和581nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。
