从细菌中稳定并纯化至多100 μg的总RNA
RNeasy Protect Bacteria Mini Kit包含RNAprotect Bacteria Reagent和RNeasy离心柱,前者用于稳定细菌样本中的RNA,后者使用硅胶膜技术纯化得到至多100 µg高品质RNA。可通过使用TissueLyser II实现高效破碎细菌样品。纯化过程可在QIAcube全自动核酸纯化仪上自动运行。
RNeasy Protect Bacteria Mini Kit适用于分子生物学应用。该产品不适用于疾病的诊断、预防或治疗。
在RNA分离前,直接向1体积的细菌培养基(≤7.5 x 108个细菌)中加入2体积的RNAprotect Bacteria Reagent,可立即稳定RNA(参见"RNAprotect Bacteria Reagent procedure")。对样本的稳定使细菌的高效裂解有多种可选的实验方案:酶裂解、机械破碎或两种方法结合使用。我们推荐使用TissueLyser II进行高效的机械破碎。然后将乙醇加入裂解液中以提供理想的结合条件。裂解液加到RNeasy硅胶膜上(结合能力达100 µg RNA)。RNA结合到膜上后,所有污染物被高效洗去。可用30–100 µl水洗脱得到浓缩的纯RNA。RNeasy Protect Bacteria Mini Kit可在QIAcube全自动核酸纯化仪上实现自动化。
由于物种和生长状况不同可能导致从细菌中分离的RNA产量不同。RNeasy Protect Bacteria Mini Kit适用于各种细菌,包括革兰氏阳性菌(如Staphylococcus aureus和Mycobacterium avium)和革兰氏阴性菌(如Escherichia coli和Salmonella typhimurium)。生长在限制或完全培养基中的细菌均可使用。由于RNeasy操作流程能纯化大于200 nt的RNA,得到的RNA中不包含5S rRNA、tRNAs和其他低分子量RNAs。RNeasy Protect Kits提供最高品质RNA,几乎无DNA残留。对微量DNA非常敏感的RNA应用,残留的DNA可在RNeasy操作流程中使用RNase-Free DNase Set方便地进行DNase柱上处理。
使用RNeasy Protect Bacteria Mini Kit纯化的RNA非常适用于多种应用。下游应用包括:
-
Northern印迹、点印迹和狭缝印迹
- 终点法RT-PCR
-
定量real-time RT-PCR
-
芯片分析FeaturesSpecifications
应用 PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray 洗脱体积 30–100 µl 规格 Spin column 主要样本类型 Bacteria 处理 Manual (centrifugation) 纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白 RNA 样本量 15 –100 µg 稳定 Yes 技术 Silica technology 每次运行或制备时间 20 minutes 产量 8–70 µg