CFSE(CFDA-SE)是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，CFSE 进入细胞后可以不可逆地与细胞内的氨基结合偶联到细胞蛋白质上。在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中,因此其荧光强度是亲代细胞的一半，用流式细胞仪或荧光显微镜在490 nm 激发光处可对其进行分析。荧光探针CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光染色最强，并证实CFSE不影响细胞的增殖能力。

荧光染料CFSE 是一种很有价值的细胞标记示踪剂，不仅用于细胞增殖的体外实验,也可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。

染色例：
       

＊同仁化学研究所需要根据老师具体的实验目的，提供给老师更加详细的技术服务，以保证老师实验顺利、成功。
＊建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、CFSE的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。
配制试剂：
1、从冰箱中取出CFSE试剂，放至室温后再打开。盛放CFSE的管子开盖前请轻弹管壁几次，让粉末充分落入管底，必要时可采用离心的方法。
2、取0.9 ml DMSOa)加到CFSE管中溶解，配制成2 mM的CFSE母液b)（加入DMSO后请先盖上盖子，反复颠倒把盖子和管壁上的试剂洗到底部，并用移液器反复吹打使溶解完全）。
3、用PBS(-)或适当的缓冲液将其稀释成100 μM或其它浓度（如果采用载玻片观察法，建议浓度为20 μM）的工作液c)。
a) DMSO需要保证新鲜无水，否则将会导致AM体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。
b) 由于CFSE母液遇水极易分解，所以建议分装保存，例如分装成5 μl/管。
方法：分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，≦-20℃冷冻保存。
c) CFSE工作液应现配现用，因为CFSE吸水会分解，影响染色效果。
* PBS(-)：不含钙和镁离子的PBS。
细胞染色(仅供参考)：
例1  培养板观察法
1、准备细胞悬液，用PBS(-)等合适的培养基a)调整细胞浓度至约107个／ml。
2、取1ml细胞悬液至试管中，加入适量CFSE工作液，轻轻搅拌混匀（建议CFSE的终浓度参考相关论文或做个预实验：分别设定终浓度为0.5,1,2,5,10,20 μM…,以确定最佳染色浓度b)）。
3、在37℃培养箱中培养15-30分钟。
4、离心后去上清，加入2 ml PBS溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。
5、加入合适的培养基制成细胞悬液。
6、取500 μl的细胞悬液加在培养孔中，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整细胞数量c)进行实验。
例2 载玻片观察法
1、准备1 ml细胞悬液，用PBS(-)等合适的培养基a)调整细胞浓度至约107个／ml。
2、取30 μl细胞悬液至试管中，加入10 μl浓度为20 μM的CFSE工作液（终浓度为5 μM），轻轻搅拌混匀b)。
3、在37 oC培养箱中培养15-30分钟。
4、滴10 μl的细胞悬液在载玻片上，用荧光显微镜观察，看到荧光后，根据自己实验的要求调整细胞数量C)进行实验。
＊如果背景高的话，第3步之后需要洗去多余的CFSE：
离心后去上清，加入90 μl PBS溶液，再离心后去上清，重复此操作一次。
a)尽可能用不含血清的培养基，血清中的酶和蛋白质会分解CFSE，可能会影响染色效果。
b)如果荧光强度弱，可以适当提高CFSE的终浓度。如果细胞毒性大或背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。
c)根据不同的实验目的和要求，采用稀释的方法调整细胞数量。

实验操作：