产品说明：
当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG会积聚，GSH与GSSG的比例会降低。谷胱甘肽还原酶将GSSG回收为GSH，同时氧化b-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐。GSH / GSSG比率的监测和生物样品中GSSG的定量对于评估细胞和组织的氧化还原和解毒状态至关重要，这与谷胱甘肽对氧化和自由基介导的细胞损伤的保护作用有关。有一些试剂或检测试剂盒可用于生物系统中硫醇的定量。然而，所有商业试剂盒要么缺乏灵敏度，要么协议繁琐。我们的 Amplite® 快速荧光法 GSH/GSSG 比值试剂盒 （#10060） 提供了一种超灵敏的检测方法，可定量样品中的 GSH。该试剂盒使用专有的水溶性非荧光染料，与硫醇反应后会发出强烈的荧光。该试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光方法，可在 1 μL 测定体积中检测低至 100 皮摩尔的半胱氨酸或 GSH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行，无需分离步骤即可轻松适应自动化。荧光酶标仪可以轻松读取其信号。
组件
组分 A：硫石™绿 520WS 1瓶
组分B：检测缓冲液 1 瓶 （25 mL）
组件C：GSH标准 1 瓶 （62 μg）
组件D：GSSG探头 1瓶（冻干粉）
构成部分E：GSSG标准 1 瓶 （124 μg）
示例协议
一目了然
协议摘要
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. 谷胱甘肽标准溶液（1 mM）
将 200 μL 检测缓冲液（组分 B）加入 GSH 标准品（组分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSH 标准溶液。
2. GSSG 标准储备溶液 （1 mM）
加入 200 μL ddH2O 放入 GSSG 标准品（组分 E）的小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSSG 标准溶液。
3. 硫石™绿520WS储备液（100X）
加入 100 μL ddH2O放入小瓶中加入硫石绿520WS（组分A），制成100X硫石™™绿520WS储备溶液。
注意 避光。
标准溶液的制备
GSH 或 GSSG 标准
制备的连续稀释的GSH标准品（0至10 μM）：将10 μL 1 mM （1 nmol/μL） GSH标准溶液加入990 μL检测缓冲液（组分B）中，以生成10 μM （10 pmol/μL）GSH标准溶液（GSH7）。取10 μM （10 pmol/μL）GSH标准溶液（GSH7），在测定缓冲液（组分B）中进行1：2连续稀释，以获得连续稀释的GSH标准品（GSH6 - GSH1）。注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。4小时内用完。制备连续稀释的GSSG标准品（0至5 μM）：将10 μL 1 mM （1 nmol / μL）GSSG标准溶液加入990 μL测定缓冲液（组分B）中，以生成10 μM （10 pmol/μL）GSSG标准溶液。取10 μM（10 pmol/μL）GSSG标准溶液，在测定缓冲液（组分B）中进行1：2连续稀释，以获得连续稀释的GSSG标准品（GSSG7 - GSSG1）。注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。4小时内用完。
工作溶液的制备
1. GSH工作解决方案
将 100 μL 100X 硫石™绿 520WS 储备溶液加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，并通过涡旋充分混合。
注意此GSH工作溶液（GSH-WS）足以用于两个96孔板。避光时，它在4°C下稳定至少4小时。
2. 总GSH工作解决方案
将 5 mL GSH-WS 加入 GSSG 探针（组分 D）瓶中并充分混合。
注意此总GSH工作溶液（TGSH-WS）足以用于一个96孔板。常温下不稳定，2小时内应及时使用。
注意 避免暴露在光线下。
注意或者，可以通过添加 25 μL ddH 来制作 200X GSSG 探头2O放入GSSG探针（组分D）瓶中，然后将储备溶液与GSH-WS按比例混合来制备TSGS-WS。
当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG会积聚，GSH与GSSG的比例会降低。谷胱甘肽还原酶将GSSG回收为GSH，同时氧化b-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐。GSH / GSSG比率的监测和生物样品中GSSG的定量对于评估细胞和组织的氧化还原和解毒状态至关重要，这与谷胱甘肽对氧化和自由基介导的细胞损伤的保护作用有关。有一些试剂或检测试剂盒可用于生物系统中硫醇的定量。然而，所有商业试剂盒要么缺乏灵敏度，要么协议繁琐。我们的 Amplite® 快速荧光法 GSH/GSSG 比值试剂盒 （#10060） 提供了一种超灵敏的检测方法，可定量样品中的 GSH。该试剂盒使用专有的水溶性非荧光染料，与硫醇反应后会发出强烈的荧光。该试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光方法，可在 1 μL 测定体积中检测低至 100 皮摩尔的半胱氨酸或 GSH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行，无需分离步骤即可轻松适应自动化。荧光酶标仪可以轻松读取其信号。
组件
组分 A：硫石™绿 520WS 1瓶
组分B：检测缓冲液 1 瓶 （25 mL）
组件C：GSH标准 1 瓶 （62 μg）
组件D：GSSG探头 1瓶（冻干粉）
构成部分E：GSSG标准 1 瓶 （124 μg）
示例协议
一目了然
协议摘要
- 制备谷胱甘肽工作溶液（50 μL）
- 添加GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50 μL）
- 在室温下孵育 10 至 60 分钟
- 监测Ex/Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）下的荧光增加
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. 谷胱甘肽标准溶液（1 mM）
将 200 μL 检测缓冲液（组分 B）加入 GSH 标准品（组分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSH 标准溶液。
2. GSSG 标准储备溶液 （1 mM）
加入 200 μL ddH2O 放入 GSSG 标准品（组分 E）的小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSSG 标准溶液。
3. 硫石™绿520WS储备液（100X）
加入 100 μL ddH2O放入小瓶中加入硫石绿520WS（组分A），制成100X硫石™™绿520WS储备溶液。
注意 避光。
标准溶液的制备
GSH 或 GSSG 标准
制备的连续稀释的GSH标准品（0至10 μM）：将10 μL 1 mM （1 nmol/μL） GSH标准溶液加入990 μL检测缓冲液（组分B）中，以生成10 μM （10 pmol/μL）GSH标准溶液（GSH7）。取10 μM （10 pmol/μL）GSH标准溶液（GSH7），在测定缓冲液（组分B）中进行1：2连续稀释，以获得连续稀释的GSH标准品（GSH6 - GSH1）。注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。4小时内用完。制备连续稀释的GSSG标准品（0至5 μM）：将10 μL 1 mM （1 nmol / μL）GSSG标准溶液加入990 μL测定缓冲液（组分B）中，以生成10 μM （10 pmol/μL）GSSG标准溶液。取10 μM（10 pmol/μL）GSSG标准溶液，在测定缓冲液（组分B）中进行1：2连续稀释，以获得连续稀释的GSSG标准品（GSSG7 - GSSG1）。注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。4小时内用完。
工作溶液的制备
1. GSH工作解决方案
将 100 μL 100X 硫石™绿 520WS 储备溶液加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，并通过涡旋充分混合。
注意此GSH工作溶液（GSH-WS）足以用于两个96孔板。避光时，它在4°C下稳定至少4小时。
2. 总GSH工作解决方案
将 5 mL GSH-WS 加入 GSSG 探针（组分 D）瓶中并充分混合。
注意此总GSH工作溶液（TGSH-WS）足以用于一个96孔板。常温下不稳定，2小时内应及时使用。
注意 避免暴露在光线下。
注意或者，可以通过添加 25 μL ddH 来制作 200X GSSG 探头2O放入GSSG探针（组分D）瓶中，然后将储备溶液与GSH-WS按比例混合来制备TSGS-WS。
