产品说明：
ReadiPrep™ 核/细胞质分级分离试剂盒可从哺乳动物细胞或组织中逐步分离细胞核和细胞质提取物。分离的蛋白质具有高浓度并保持其生物活性。ReadiPrep™ 核/细胞质分离试剂盒的核和细胞质提取物与许多下游应用兼容，包括酶活性测定和荧光蛋白质印迹等。
 
组件
组分A：胞质提取缓冲液    1 瓶 （25 毫升）
组件B：核萃取缓冲液  1 瓶 （8 毫升）
组分C：10X蛋白酶抑制剂 1 瓶 （4 mL）
组件 D：DTT （1 M）      1 瓶 （100 uL）
 
示例协议
 
协议摘要
 

1. 用PBS冲洗细胞
2. 加入 500 μL 细胞质提取缓冲液
3. 离心20秒
4. 收集上清液（细胞质提取物）
5. 将沉淀重新悬浮在 150 μL 1X 高盐缓冲液中
6. 离心20分钟
7. 收集上清液（核提取物）

 
重要说明
在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
 
工作溶液的制备
1. 胞质提取缓冲液 （1X）：
将 100 μL 10X 蛋白酶抑制剂（组分 C）和 1 μL DTT（组分 D）加入 0.9 mL 细胞质提取缓冲液（组分 A）中。
 
2. 核提取缓冲液 （1X）：
将 100 μL 10X 蛋白酶抑制剂（组分 C）和 1 μL DTT（组分 D）加入 0.9 mL 核提取缓冲液（组分 B）中。
 
注意：0.5 mL 1X 细胞质提取缓冲液和 150 μL 1X 核提取缓冲液足以进行 1 次测定，根据需要制备新鲜缓冲液。
 
实验方案样本

1. 用冷PBS冲洗细胞1次。对于悬浮细胞，通过离心收集细胞。
2. 向细胞中加入 500 μL 1X 细胞质提取缓冲液。对于贴壁细胞，将贴壁细胞刮入 1.5 mL 离心管中。
3. 剧烈涡旋以完全重新悬浮细胞。
4. 以16，000g离心1-2分钟，并将上清液（细胞质提取物）转移到另一个干净的管中。将管子放在冰上以备下游应用或储存在-80°C。
5. 将沉淀重悬于150μL 1X核提取缓冲液中。
6. 剧烈涡旋以完全重新悬浮颗粒。
7. 将试管在 4°C 下旋转 30 分钟。
8. 以16，000g离心20分钟，然后将上清液（核提取物）转移到另一个干净的管中。将管子放在冰上以备下游应用或储存在-80°C。