产品说明:
脂多糖(LPS),也称为内毒素,是革兰氏阴性菌外膜的主要成分。LPS是脊椎动物先天免疫系统的有效刺激剂,可引起发烧,感染性休克并最终死亡。LPS也被认为是检测细菌病原体入侵的生物标志物,并在极端情况下负责炎症反应和内毒性休克的发展。检测蛋白质、肽或抗体样品等生物材料中的LPS是生物制造和加工中的一项关键任务。Amplite®荧光内毒素检测试剂盒使用内毒素绿™,这是一种敏感的荧光底物。内毒素绿™在内毒素和鲎变形细胞裂解物(LAL)的存在下水解,LAL是鲎的血细胞提取物。内毒素绿™的水解产物产生强烈的绿色荧光。内毒素活性与内毒素绿™水解产生的荧光强度成正比。Amplite®荧光内毒素检测试剂盒可以检测多种内毒素(从1 EU/ml到0.001 EU/ml)。它非常灵敏,可在 0 分钟内检测到低至 001.30 EU/mL 的内毒素。
组件
组件 A: 1瓶
组件 B: 1 瓶 (25 毫升)
组件 C: 1瓶
组成D: 1 瓶 (100 EU/mL)
构成部分E: 1 瓶 (100 μL)
示例协议
协议摘要
重要
在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分。
实验中使用的所有材料都应不含内毒素,例如:一次性试管或 1.5 mL 微量离心管、一次性移液器吸头和一次性 96 孔微孔板或板条。所有实验室器具的清洁度都需要准确检测给定样品中的内毒素水平。
储备溶液的制备
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. 100 X 内毒素绿色™储备液
将 50 μL DMSO 加入内毒素绿(组分 A)小瓶中,制成 100X 内毒素绿™™储备溶液。
注意 避光。
2. 5X鲎变形细胞裂解液
将 500 μL 无内毒素水(组分 B)加入鲎变形细胞裂解物(组分 C)小瓶中,制成 5X 鲎变形细胞裂解液溶液。
标准溶液的制备
大肠杆菌内毒素标准溶液
将 10 μL 100 EU/mL 大肠杆菌内毒素标准溶液加入 990 μL 无内毒素水(组分 B)中,生成 1 EU/mL 大肠杆菌内毒素标准溶液 (ES1)。然后取1 EU/mL大肠杆菌内毒素标准溶液(ES1),在无内毒素水(组分B)中进行1:3连续稀释,得到连续稀释的大肠杆菌内毒素标准品(ES2 - ES7)。
工作溶液的制备
1.内毒素绿色™工作溶液
将 50 μL 内毒素绿色储备溶液加入 5 mL 无内毒素水(组分 B)中,制成总体积为 5.05 mL 的内毒素绿色™™工作溶液。
说明 根据需要准备内毒素绿™工作溶液的量。保持工作溶液避光。
2. 鲎变形细胞裂解物(LAL)工作溶液
将 500 μL 鲎变形细胞裂解物 (LAL) 储备溶液加入 2 mL 无内毒素水(组分 B)中,制成总体积为 2.5 mL 的鲎变形细胞裂解物 (LAL) 工作溶液。
注意 根据需要和使用前准备LAL工作溶液的量。使用不含内毒素的瓶子或管子。
脂多糖(LPS),也称为内毒素,是革兰氏阴性菌外膜的主要成分。LPS是脊椎动物先天免疫系统的有效刺激剂,可引起发烧,感染性休克并最终死亡。LPS也被认为是检测细菌病原体入侵的生物标志物,并在极端情况下负责炎症反应和内毒性休克的发展。检测蛋白质、肽或抗体样品等生物材料中的LPS是生物制造和加工中的一项关键任务。Amplite®荧光内毒素检测试剂盒使用内毒素绿™,这是一种敏感的荧光底物。内毒素绿™在内毒素和鲎变形细胞裂解物(LAL)的存在下水解,LAL是鲎的血细胞提取物。内毒素绿™的水解产物产生强烈的绿色荧光。内毒素活性与内毒素绿™水解产生的荧光强度成正比。Amplite®荧光内毒素检测试剂盒可以检测多种内毒素(从1 EU/ml到0.001 EU/ml)。它非常灵敏,可在 0 分钟内检测到低至 001.30 EU/mL 的内毒素。
组件
组件 A: 1瓶
组件 B: 1 瓶 (25 毫升)
组件 C: 1瓶
组成D: 1 瓶 (100 EU/mL)
构成部分E: 1 瓶 (100 μL)
示例协议
协议摘要
- 制备内毒素绿色™工作溶液
- 加入大肠杆菌内毒素标准品和测试样品(25 μL)
- 加入鲎变形细胞裂解液(25 μL)
- 在37°C孵育30分钟
- 添加内毒素绿色™工作溶液(50 μL)
- 在 490 分钟内读取 Ex/Em=525/10 nm 处的荧光强度
重要
在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分。
实验中使用的所有材料都应不含内毒素,例如:一次性试管或 1.5 mL 微量离心管、一次性移液器吸头和一次性 96 孔微孔板或板条。所有实验室器具的清洁度都需要准确检测给定样品中的内毒素水平。
储备溶液的制备
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. 100 X 内毒素绿色™储备液
将 50 μL DMSO 加入内毒素绿(组分 A)小瓶中,制成 100X 内毒素绿™™储备溶液。
注意 避光。
2. 5X鲎变形细胞裂解液
将 500 μL 无内毒素水(组分 B)加入鲎变形细胞裂解物(组分 C)小瓶中,制成 5X 鲎变形细胞裂解液溶液。
标准溶液的制备
大肠杆菌内毒素标准溶液
将 10 μL 100 EU/mL 大肠杆菌内毒素标准溶液加入 990 μL 无内毒素水(组分 B)中,生成 1 EU/mL 大肠杆菌内毒素标准溶液 (ES1)。然后取1 EU/mL大肠杆菌内毒素标准溶液(ES1),在无内毒素水(组分B)中进行1:3连续稀释,得到连续稀释的大肠杆菌内毒素标准品(ES2 - ES7)。
工作溶液的制备
1.内毒素绿色™工作溶液
将 50 μL 内毒素绿色储备溶液加入 5 mL 无内毒素水(组分 B)中,制成总体积为 5.05 mL 的内毒素绿色™™工作溶液。
说明 根据需要准备内毒素绿™工作溶液的量。保持工作溶液避光。
2. 鲎变形细胞裂解物(LAL)工作溶液
将 500 μL 鲎变形细胞裂解物 (LAL) 储备溶液加入 2 mL 无内毒素水(组分 B)中,制成总体积为 2.5 mL 的鲎变形细胞裂解物 (LAL) 工作溶液。
注意 根据需要和使用前准备LAL工作溶液的量。使用不含内毒素的瓶子或管子。