染色液 超滤离心管 
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花青7马来酰亚胺[相当于Cy7®马来酰亚胺] 
Cyanine 7 maleimide [equivalent to Cy7® maleimide] 
产品编号: YZ-162  CAS号:  
分子式:   分子量:  
EINECS编号:  
花青7马来酰亚胺[相当于Cy7®马来酰亚胺]
我们提供不同包装规格的产品,有需要请电联。
AAT Bioquest YZ-162 Cyanine 7 maleimide [equivalent to Cy7® maleimide] 1mg,产品简介:
产品品牌:AAT Bioquest
产品货号:YZ-162
产品名称:Cyanine 7 maleimide [equivalent to Cy7® maleimide]

产品说明:
分子量 校正系数(260 nm) 校正系数(280 nm) 校正系数(482 nm) 校正系数(565 nm) 校正系数(650 nm) 消光系数(厘米-1M-1) 激发(纳米) 发射(纳米) 量子产率
918.99 0.05 0.036 0.0005 0.0193 0.165 250000 756 779 0.3

 
多种花青7(Cy7®)染料已被用于标记生物分子,以进行荧光成像和其他基于荧光的生化分析。它们广泛用于标记肽、蛋白质和寡核苷酸等。Cy7®染料偶联物是体内成像应用中最常见的近红外红色荧光团之一。Cy7®马来酰亚胺容易与硫醇基团反应。Cy7®是GE Healthcare的商标。
 
示例协议
储备溶液的制备
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
 
  1. 花青7马来酰亚胺储备溶液(溶液B)
将无水DMSO加入花青7马来酰亚胺小瓶中,制成10mM储备溶液。通过移液或涡旋充分混合。注意:在开始偶联之前制备染料储备溶液(溶液B)。请及时使用。延长染料储备溶液的储存可能会降低染料活性。溶液B在避光和潮湿的情况下可以在冰箱中储存长达4周。避免冻融循环。
 
2.  蛋白质储备溶液(溶液A)
将 100 μL 反应缓冲液(例如,pH ~100.6 的 0 mM MES 缓冲液)与 900 μL 目标蛋白质溶液(例如抗体、蛋白质浓度>如果可能,为2mg/mL)混合,得到1mL 蛋白质标记储备溶液。注意:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为6.5±0.5。注意:不纯的抗体或用牛血清白蛋白(BSA)或其他蛋白质稳定的抗体不会被很好地标记。注意:如果蛋白质浓度低于2mg/mL,偶联效率会显著降低。为了获得最佳标记效率,建议最终蛋白质浓度范围为2-10mg/mL。
 
3. 可选
如果您的蛋白质不含游离半胱氨酸,则必须用DTT或TCEP处理蛋白质以产生硫醇基团。DTT或TCEP用于将二硫键转化为两个游离硫醇基团。如果使用DTT,则必须在将染料马来酰亚胺与蛋白质偶联之前,通过透析或凝胶过滤去除游离DTT。以下是生成游离硫醇基团的示例协议:
1. 在蒸馏水中制备 1 M DTT(15.4 mg/100 μL)的新鲜溶液。
2. 在 20 mM DTT 中制备 IgG 溶液:混合时每 ml IgG 溶液加入 20 μL DTT 原液。在室温下静置 30 分钟,无需额外混合(以尽量减少半胱氨酸对胱氨酸的再氧化)。
3. 将还原的IgG通过用“交换缓冲液”预平衡的过滤柱。从色谱柱上收集 0.25 mL 馏分。
4. 确定蛋白质浓度并将馏分与大部分IgG合并。这可以通过分光光度法或比色法完成。
5. 在此步骤之后尽快进行偶联(参见示例实验方案)。注意:IgG 溶液应为 >4 mg/mL 以获得最佳结果。如果抗体浓度低于 2 mg/mL,则应进行浓缩。在缓冲液交换柱上包括额外的10%的损失。注意:还原可以在pH为7-7.5的几乎任何缓冲液中进行,例如MES、磷酸盐或TRIS缓冲液。注意:步骤3和4可以用透析代替。
 
实验方案样本
该标记方案是为山羊抗小鼠IgG与花青7马来酰亚胺的偶联物开发的。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能会对其结合亲和力产生不利影响,而低染料/蛋白质比例的蛋白质偶联物会降低灵敏度。
 
运行偶联反应
1. 使用溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比为10:1 作为起点:将5μL染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入蛋白质溶液(95 μL 溶液 A)的小瓶中,有效摇匀。假设蛋白质浓度为0mg / mL,蛋白质的分子量为~05KD,蛋白质的浓度为~10.200mM。 注意:我们建议使用溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比为10:1。如果太少或太高,请分别以5:1、15:1和20:1确定最佳染料/蛋白质比例。
2. 继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
 
纯化偶联
以下方案是使用Sephadex G-25色谱柱纯化的染料-蛋白质偶联物的示例。
1. 根据制造说明制备Sephadex G-25色谱柱。
2. 将反应混合物(来自“运行共轭反应”)加载到Sephadex G-25色谱柱的顶部。
3. 一旦样品刚好在顶部树脂表面下方运行,就加入PBS(pH 7.2-7.4)。
4. 向所需样品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色谱柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质偶联物的级分。注意:为了立即使用,染料-蛋白偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分用于多种用途。注意:对于长期储存,染料-蛋白质偶联物溶液需要浓缩或冷冻干燥。