AAT Bioquest YZ-1023  iFluor®488 succinimidyl ester 1mg，产品简介：

产品说明：

分子量	校正系数（260 nm）	校正系数（280 nm）	消光系数（厘米-1M-1)	激发（纳米）	发射（纳米）	量子产率
945.07	0.21	0.11	7500001	491	516	0.91

尽管FITC仍然是制备绿色荧光生物偶联物最常用的荧光标记染料，但FITC存在一定的局限性，例如显微镜成像的严重光漂白和pH敏感荧光。用iFluor® 488染料制备的蛋白质偶联物远远优于荧光素衍生物（如FITC）的偶联物。iFluor® 488偶联物比荧光素偶联物明显更亮，并且更易于光化。此外，iFluor® 488的荧光不受pH值（4-10）的影响。这种pH不敏感性是对荧光素的重大改进，荧光素仅在pH高于9时发出最大荧光。iFluor® 488 SE染料相当稳定，对蛋白质氨基基团具有良好的反应性和选择性。这款iFluor 488具有类似于Alexa Fluor 488 NHS酯的光谱特性和反应性（Alexa Fluor®®®是Invitrogen的商标）。
 
示例协议
 
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
 
蛋白质储备溶液（溶液A）

1. 将 100 μL 反应缓冲液（例如，pH ~1.1 的 9 M 碳酸钠溶液或 0 M 磷酸盐缓冲液）与 900 μL 目标蛋白溶液（例如抗体、蛋白质浓度 >如果可能，为 2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记储备溶液。

 
注意： 蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0，则使用8 M碳酸氢钠溶液或0 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至1.1-9.0的范围。
 
注意： 蛋白质应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中，pH 7.2-7.4。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如**铵和乙**）。
 
注意： 不纯抗体或用牛血清白蛋白（BSA）或明胶稳定的抗体将无法很好地标记。叠***或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。叠***或硫柳汞可以通过透析或离心柱去除，以获得最佳标记结果。
 
注意： 如果蛋白质浓度低于2 mg/mL，偶联效率会显著降低。建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL，以获得最佳标记效率。
 
iFluor™ 488 SE储备液（溶液B）

1. 将无水DMSO加入iFluor™ 488 SE的小瓶中，制成10 mM储备溶液。通过移液或涡旋充分混合。

 
注意： 在开始偶联之前制备染料储备溶液（溶液B）。请及时使用。延长染料储备溶液的储存可能会降低染料活性。溶液B在避光和潮湿的情况下可以在冰箱中储存两周。避免冻融循环。
 
实验方案样本
该标记方案是为山羊抗小鼠IgG与iFluor™ 488 SE的偶联物开发的。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
 
注意： 每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能会对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比例的蛋白质偶联物会降低灵敏度。
 
运行偶联反应

1. 使用溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的10：1摩尔比作为起点：将5 μL染料储备溶液（溶液B，假设染料储备溶液为10 mM）加入蛋白质溶液（95 μL溶液A）的小瓶中，有效摇匀。假设蛋白质浓度为0mg / mL，蛋白质的分子量为~05KD，蛋白质的浓度为~10.200mM。

 
注意： 我们建议使用溶液B（染料）/溶液A（蛋白质）的摩尔比为10：1。如果太少或太高，请分别在 5：1、15：1 和 20：1 确定最佳染料/蛋白质比例。
 

2. 继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 
纯化偶联
以下方案是使用Sephadex G-25色谱柱纯化的染料-蛋白质偶联物的示例。
 

1. 根据制造说明制备Sephadex G-25色谱柱。
2. 将反应混合物（来自“运行共轭反应”）加载到Sephadex G-25色谱柱的顶部。
3. 一旦样品刚好在顶部树脂表面下方运行，就加入PBS（pH 7.2-7.4）。
4. 向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质偶联物的级分。

 
注意： 为了立即使用，染料-蛋白偶联物必须用染色缓冲液稀释，并等分用于多种用途。
 
注意： 对于长期储存，染料-蛋白质偶联物溶液需要浓缩或冷冻干燥。
 
产品系列

产品名称	激发 （纳米）	发射 （纳米）	消光系数 （厘米-1M-1)	量子产率	校正系数 （260 nm）		校正系数 （280 nm）
iFluor® 350 succinimidyl ester	345	450	200001	0.951	0.83		0.23
iFluor® 405 succinimidyl ester	403	427	370001	0.911	0.48		0.77
iFluor® 514 succinimidyl ester	511	527	750001	0.831	0.265		0.116
iFluor® 532 succinimidyl ester	537	560	900001	0.681	0.26		0.16
iFluor® 555 succinimidyl ester	557	570	1000001	0.641	0.23		0.14
iFluor® 594 succinimidyl ester	588	604	1800001	0.531	0.05		0.04
iFluor® 633 succinimidyl ester	640	654	2500001	0.291	0.062		0.044
iFluor® 647 succinimidyl ester	656	670	2500001	0.251	0.03		0.03
iFluor® 660 succinimidyl ester	663	678	2500001	0.261	0.07		0.08
iFluor® 680 succinimidyl ester	684	701	2200001	0.231	0.097		0.094
iFluor® 700 succinimidyl ester	690	713	2200001	0.231	0.09		0.04
iFluor® 750 succinimidyl ester	757	779	2750001	0.121	0.044		0.039
iFluor® 610 succinimidyl ester	610	628	1100001	0.851	0.32		0.49
iFluor® 710 succinimidyl ester	717	739	1900001	0.601	0.12		0.07
iFluor® 790 succinimidyl ester	787	812	2500001	0.131		0.1		0.09
iFluor® 800 succinimidyl ester	801	820	2500001	0.111		0.03		0.08
iFluor® 810 succinimidyl ester	811	822	2500001	0.051		0.09		0.15
iFluor® 820 succinimidyl ester	822	850	2500001			0.11		0.16
iFluor® 860 succinimidyl ester	853	878	2500001			0.1		0.14
iFluor® 546 succinimidyl ester	541	557	1000001	0.671		0.25		0.15
iFluor® 568 succinimidyl ester	568	587	1000001	0.571		0.34		0.15
iFluor® 430 succinimidyl ester	433	498	400001	0.781		0.68		0.3
iFluor® 450 succinimidyl ester	451	502	400001	0.821		0.45		0.27
iFluor® 840 succinimidyl ester	836	879	2000001	-		0.2		0.09
iFluor® 560 succinimidyl ester	560	571	1200001	0.571		0.0482		0.069
iFluor® 670 succinimidyl ester	671	682	2000001	0.551		0.03		0.033
iFluor® 460 succinimidyl ester	468	493	800001	~0.81		0.98		0.46
iFluor® 440 succinimidyl ester	434	480	400001	0.671		0.352		0.229
iFluor® 665 succinimidyl ester	667	692	110,0001	0.221		0.12		0.09
iFluor® 690 succinimidyl ester	685	704	2200001	0.301		0.09		0.06
iFluor® 720 succinimidyl ester	716	740	2400001	0.141		0.15		0.13
iFluor® 740 succinimidyl ester	742	764	2250001	0.201		0.16		0.16
iFluor® 597 succinimidyl ester	598	618	1000001	0.71		0.335		0.514
iFluor® 770 succinimidyl ester	777	797	2500001	0.16		0.09		0.08
iFluor® 780 succinimidyl ester	784	808	2500001	0.161		0.13		0.12
iFluor® 570 succinimidyl ester	560	571	1200001	0.581		0.048		0.069
iFluor® 830 succinimidyl ester	830	867	-	-		-		-