AAT Bioquest YZ-1149 mFluor™ Violet 500 SE 1mg
产品说明：
mFluor™染料专为多色流式细胞术应用而开发。这些染料具有较大的斯托克斯位移，并且可以被流式细胞仪的激光线（例如，405 nm、488 nm和633 nm）很好地激发。mFluor™ Violet 500染料的荧光激发和发射最大值分别为~405 nm和~500 nm。这些光谱特性使其成为太平洋绿™（赛默飞世尔）和BD Horizon™ V500标记染料的绝佳替代品。mFluor™ Violet 500 SE相当稳定，对蛋白质氨基基团表现出良好的反应性和选择性。mFluor™ Violet 500 SE为使用紫色激光激发标记流式细胞术应用的单克隆、多克隆抗体或其他蛋白质（>10 kDa）提供了一种方便的工具。在相同条件下，mFluor Violet 500染料偶联物明显比Pacific Green™（赛默飞世尔）和BD Horizon™ V500的相应生物偶联物更亮，吸收更强，使mFluor™™ Violet 500偶联物更加灵敏。
示例协议
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. 蛋白质储备液（溶液A）
将 100 μL 反应缓冲液（例如，pH ~1.1 的 9 M 碳酸*溶液或 0 M 磷酸盐缓冲液）与 900 μL 目标蛋白溶液（例如抗体、蛋白质浓度>如果可能，为 2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记储备溶液。
注意蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0，则使用8 M碳酸*钠溶液或0 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至1.1-9.0的范围。
注意蛋白质应溶解在pH 1.7-2.7的4X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如**铵和乙**）。
注意 不纯抗体或用牛血清白蛋白 （BSA） 或明胶稳定的抗体不会很好地标记。叠***或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。叠***或硫柳汞可以通过透析或离心柱去除，以获得最佳标记结果。
注意 如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，则偶联效率会显着降低。为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
2. mFluor™ Violet 500 SE储备溶液（溶液B）
将无水DMSO加入mFluor™ Violet 500 SE的小瓶中，制成10 mM储备溶液。通过移液或涡旋充分混合。
注意 在开始偶联之前准备染料储备溶液（溶液B）。请及时使用。延长染料储备溶液的储存可能会降低染料活性。溶液B可以在避光和潮湿的情况下在冰箱中储存两周。避免冻融循环。
实验方案样本
该标记方案是为山羊抗小鼠IgG与mFluor™ Violet 500 SE的偶联物开发的。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能会对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比例的蛋白质偶联物会降低灵敏度。
运行偶联反应
纯化偶联
以下方案是使用Sephadex G-25色谱柱纯化的染料-蛋白质偶联物的示例。
注意 对于长期储存，染料-蛋白质偶联物溶液需要浓缩或冷冻干燥。
产品说明：
| 分子量 |
吸光度（纳米） |
校正系数（260 nm） |
校正系数（280 nm） |
消光系数（厘米-1M-1) |
激发（纳米） |
发射（纳米） |
量子产率 |
| 672.71 | 412 | 0.769 | 0.365 | 250001 | 410 | 501 | 0.811 |
mFluor™染料专为多色流式细胞术应用而开发。这些染料具有较大的斯托克斯位移，并且可以被流式细胞仪的激光线（例如，405 nm、488 nm和633 nm）很好地激发。mFluor™ Violet 500染料的荧光激发和发射最大值分别为~405 nm和~500 nm。这些光谱特性使其成为太平洋绿™（赛默飞世尔）和BD Horizon™ V500标记染料的绝佳替代品。mFluor™ Violet 500 SE相当稳定，对蛋白质氨基基团表现出良好的反应性和选择性。mFluor™ Violet 500 SE为使用紫色激光激发标记流式细胞术应用的单克隆、多克隆抗体或其他蛋白质（>10 kDa）提供了一种方便的工具。在相同条件下，mFluor Violet 500染料偶联物明显比Pacific Green™（赛默飞世尔）和BD Horizon™ V500的相应生物偶联物更亮，吸收更强，使mFluor™™ Violet 500偶联物更加灵敏。
示例协议
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. 蛋白质储备液（溶液A）
将 100 μL 反应缓冲液（例如，pH ~1.1 的 9 M 碳酸*溶液或 0 M 磷酸盐缓冲液）与 900 μL 目标蛋白溶液（例如抗体、蛋白质浓度>如果可能，为 2 mg/mL）混合，得到 1 mL 蛋白质标记储备溶液。
注意蛋白质溶液（溶液A）的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH值低于8.0，则使用8 M碳酸*钠溶液或0 M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至1.1-9.0的范围。
注意蛋白质应溶解在pH 1.7-2.7的4X磷酸盐缓冲盐水（PBS）中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中，则必须用1X PBS（pH 7.2-7.4）透析，以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如**铵和乙**）。
注意 不纯抗体或用牛血清白蛋白 （BSA） 或明胶稳定的抗体不会很好地标记。叠***或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。叠***或硫柳汞可以通过透析或离心柱去除，以获得最佳标记结果。
注意 如果蛋白质浓度低于 2 mg/mL，则偶联效率会显着降低。为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 2-10 mg/mL。
2. mFluor™ Violet 500 SE储备溶液（溶液B）
将无水DMSO加入mFluor™ Violet 500 SE的小瓶中，制成10 mM储备溶液。通过移液或涡旋充分混合。
注意 在开始偶联之前准备染料储备溶液（溶液B）。请及时使用。延长染料储备溶液的储存可能会降低染料活性。溶液B可以在避光和潮湿的情况下在冰箱中储存两周。避免冻融循环。
实验方案样本
该标记方案是为山羊抗小鼠IgG与mFluor™ Violet 500 SE的偶联物开发的。您可能需要进一步优化您的特定蛋白质。
注意每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例，这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能会对其结合亲和力产生不利影响，而低染料/蛋白质比例的蛋白质偶联物会降低灵敏度。
运行偶联反应
- 使用溶液 B（染料）/溶液 A（蛋白质）的摩尔比为 10：1 作为起点：将 5 μL 染料储备溶液（溶液 B，假设染料储备溶液为 10 mM）加入蛋白质溶液（95 μL 溶液 A）的小瓶中，有效摇匀。假设蛋白质浓度为0mg / mL，蛋白质的分子量为~05KD，蛋白质的浓度为~10.200mM。
- 继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。
纯化偶联
以下方案是使用Sephadex G-25色谱柱纯化的染料-蛋白质偶联物的示例。
- 根据制造说明制备Sephadex G-25色谱柱。
- 将反应混合物（来自“运行共轭反应”）加载到Sephadex G-25色谱柱的顶部。
- 一旦样品刚好在顶部树脂表面下方运行，就加入PBS（pH 7.2-7.4）。
- 向所需样品中加入更多PBS（pH 7.2-7.4）以完成色谱柱纯化。合并含有所需染料-蛋白质偶联物的级分。
注意 对于长期储存，染料-蛋白质偶联物溶液需要浓缩或冷冻干燥。