AAT Bioquest YZ-1299  ReadiLink™ Rapid FITC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 50 µg Antibody Per Reaction*
产品说明：

校正系数（280 nm）	消光系数（厘米-1M-1)	激发（纳米）	发射（纳米）	量子产率
0.35	730001	491	516	0.92

FITC仍然是制备绿色荧光生物偶联物最常用的荧光标记染料。然而，大多数商业FITC标签试剂盒需要大量的动手时间。该FITC ReadiLink™标记试剂盒基本上只需要2个简单的混合步骤，无需色谱柱纯化。该试剂盒提供标记~2x50 ug抗体的所有必需组分。试剂盒中提供的两瓶FITC染料中的每一个都针对标记~50μg抗体进行了优化。该FITC蛋白标记试剂盒提供了一种标记单克隆、多克隆抗体或其他蛋白质（>10 kDa）的便捷方法。
 
组件
构成部分A：FITC             2个小瓶（一个小瓶用于50μg蛋白质）
组分B：反应缓冲液            1瓶（20μL）
组分C：TQ™染色淬火缓冲液   1瓶（20μL）
 
示例协议
 
一目了然
重要
在打开之前加热所有组分并短暂离心小瓶，并在开始偶联之前立即准备所需的溶液。以下协议仅供参考。
 
 
工作溶液的制备
蛋白质工作溶液（溶液A）
要标记 50 μg 蛋白质（假设目标蛋白质浓度为 1 mg/mL），请将 5 μL（占总反应体积的 10%）反应缓冲液（组分 B）与 50 μL 目标蛋白质溶液混合。
注意 如果您的蛋白质浓度不同，请相应地调整蛋白质体积，使 ~50 μg 蛋白质可用于标记反应。
 
注意 要标记 100 μg 蛋白质（假设目标蛋白质浓度为 1 mg/mL），请将 10 μL（占总反应体积的 10%）反应缓冲液（组分 B）与 100 μL 目标蛋白质溶液混合。
 
注意 蛋白质应溶解在1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2 - 7.4中;如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，则必须对1X PBS，pH 7.2 - 7.4进行透析，或使用Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜，10 kDa（来自密理博的cat#UFC501008）去除广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐（如**铵和乙**）。
 
注意 不纯抗体或用牛血清白蛋白 （BSA） 或明胶稳定的抗体不会很好地标记。
 
注意 为了获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为 1 - 2 mg/mL，当偶联效率低于 1 mg/mL 时会显著降低。
 
 
实验方案样本
运行偶联反应

1. 将蛋白质工作溶液（溶液A）添加到一瓶标记染料（组分A）中，并通过重复移液几次或涡旋小瓶几秒钟来充分混合。

注意 如果标记 100 μg 蛋白质，请使用两个标记染料的小瓶（组分 A），方法是将 100 μg 蛋白质分成 2 x 50 μg 蛋白质，并将每 50 μg 蛋白质与一瓶标记染料反应。然后将两个小瓶合并以进行下一步。

2. 将偶联反应混合物在室温下保持30-60分钟。

注意 如果需要，共轭反应混合物可以旋转或摇动更长的时间。
 
停止偶联反应

1. 将 5 μL（用于 50 μg 蛋白质）或 10 μL（用于 100 μg 蛋白质）添加到共轭反应混合物中，占 TQ™ 染色淬灭缓冲液（组分 C）总反应体积的 10%;混合均匀。
2. 在室温下孵育10分钟。标记的蛋白质（抗体）现在可以使用了。

 
蛋白质偶联物的储存
蛋白偶联物应在载体蛋白（例如 0.5% 牛血清白蛋白）存在下储存在 > 0.1 mg/mL 下。为了延长储存时间，蛋白质偶联物可以冻干或分成一次性等分试样，并在≤ –20°C下储存。