AAT Bioquest  YZ-4503 SMCC Plus™ *Enhanced water solubility, crosslinking efficiency and stability* 5mg
产品说明：

中国科学院	分子量
92921-24-9	465.37

与SMCC和磺基SMCC相比，SMCC Plus具有更高的水溶性和交联效率。
 
示例协议
 
一目了然
重要说明
储存在<-15°C很重要，应存放在阴凉，黑暗的地方。
 
自收到之日起12个月内即可使用。注意：SMCC Plus™ 可溶于水和许多其他水性缓冲液，但稳定性低于 DMSO 或 DMF。因此，不建议制作重复使用的缓冲储备溶液。此外，其溶解度随着盐浓度的增加而降低。
 
实验方案样本

1. 为含胺蛋白制备偶联缓冲液，蛋白-NH2（缓冲液A）：磷酸盐缓冲盐水（PBS，pH 7.2）或其他pH 7.2至8.0的无胺缓冲液可用于此目的。注意：在偶联过程中避免使用含有伯胺（例如Tris或甘氨酸）和巯基的缓冲液，因为它们会与预期的反应竞争。如有必要，将样品透析或脱盐到适当的缓冲液（如PBS）中。
2. 为含巯基的蛋白质Protein-SH（缓冲液B）制备偶联缓冲液：pH为6.5-7.5的无巯基缓冲液可用于此目的。注意：在偶联过程中避免使用含有巯基的缓冲液，因为它们会与预期的反应竞争。如有必要，将样品透析或脱盐到适当的缓冲液（如PBS）中。注意：添加1-5 mM EDTA有助于螯合二价金属，从而减少含巯基蛋白质中的二硫化物形成。
3. 制备脱盐柱，从过量的交联剂和反应副产物中分离出改性蛋白质。
4. 制备含胺（蛋白质-NH2）和其偶联缓冲液A和B中的含巯基蛋白质（Protein-SH）溶液。
5. 制备蛋白 #1-SMCC Plus 偶联物：将适量的 SMCC Plus™™ 加入缓冲液 A 中的蛋白 #1 溶液中。蛋白质-NH的浓度2确定所需的 SMCC Plus™ 的摩尔比。建议所需的 SMCC Plus™ 量如下，但最佳比例必须通过使用目标蛋白通过实验确定：

• 1 mg/mL <蛋白质样品使用摩尔过量 40-80 倍。
• 1-4 mg/mL 的蛋白质样品使用摩尔过量 20 倍。
• 5-10 mg/mL 的蛋白质样品使用摩尔过量 5 至 10 倍。

6. 将上述反应混合物在室温下孵育30-60分钟或在4°C下孵育2-4小时。注意： 为了在完成之前停止偶联反应，加入含有还原半胱氨酸的缓冲液，其浓度是蛋白质-SH的巯基的几倍。注意：偶联效率可以通过电泳分离和随后的蛋白质染色来估计。
7. 使用与共轭缓冲液A平衡的脱盐柱去除多余的SMCC Plus™。
8. 混合并混合含巯基（蛋白质-SH）和脱盐含胺的蛋白质（蛋白质-NH2）-SMCC Plus™偶联物的摩尔比对应于最终偶联物所需的摩尔比，并且与两种蛋白质上存在的巯基和活化胺的相对数量一致。注意：与马来酰亚胺部分反应的分子必须具有游离（还原）巯基。对于蛋白质，在室温下使用 5 mM TCEP 还原二硫键 30 分钟，然后通过合适的脱盐柱两次。请注意，蛋白质（例如抗体）可能因二硫键完全还原而失活。IgG 中铰链区二硫键的选择性还原可以用 2-巯基乙胺•HCl （2-MEA） 完成。可以使用N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代乙酸酯（SATA）或2-亚氨基硫醇烷•HCl（特劳特试剂）将巯基添加到分子中，其可修饰伯胺。

 
储存条件
 
储存在2°C至8°C。 有效期为自收到之日起一年。
 
注意：SMCC Plus™ 对湿气敏感。商店干燥。打开前将小瓶平衡至室温，以避免水分凝结。溶解所需量的试剂，并在水解发生前立即使用。丢弃任何未使用的复溶试剂。不要将试剂储存在溶液中。