产品说明：
       亲和素/链霉亲和素-生物素相互作用是蛋白质与其配体之间已知最强的非共价生物相互作用（Kd = 10-15 M-1）。一种亲和素结合四种生物素。生物素和亲和素/链霉亲和素之间的键形成非常迅速，一旦形成，就不受pH值，有机溶剂和其他变性剂的影响。亲和素和链霉亲和素都具有基本上不可逆的生物素结合特性，因为结合的生物素只能通过使蛋白质的亚基变性来释放。生物素及其衍生物与各种亲和素的紧密和特异性结合已在许多生物学应用中得到了广泛的探索。Amplite® 比色生物素定量试剂盒提供了一种方便的方法，用于估计生物素-蛋白质偶联物中生物素与蛋白质的摩尔比或定量溶液中的生物素浓度。该测定采用HABA（4'-羟基偶**-2-羧酸），这是一种与亲和素结合时显示显着光谱变化的试剂。生物素很容易从HABA/亲和素复合物中置换HABA，导致500nm处的吸收减少。该试剂盒最适合用于测定2至16μM 范围内的生物素浓度。该测定可以以比色皿或微孔板形式进行。
 
组件
组分A：亲和素      1瓶
组分B：HABA检测缓冲液1瓶 （40mL）
组分C：d-生物素1瓶（200μL、100μM）
 
示例协议
 
一目了然
协议摘要

1. 制备 HABA/亲和素测定混合物（180μL）
2. 添加测试样品（20μL）
3. 在室温下孵育5分钟
4. 监视器在500nm处的吸光度下降

 
重要
在开始实验之前，将所有试剂盒组分解冻至室温。
 
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
 
亲和素储备液（100X）
添加 400 μL ddH2O放入亲和素（组分A）的小瓶中，充分混合。
注意 未使用的100X亲和素储备溶液应分成一次性等分试样，并在-20C下储存。
 
工作溶液的制备
HABA/亲和素检测解决方案
将 200μL 亲和素储备溶液（100X）加入20mL HABA 检测缓冲液（组分B）中，并充分混合。
注意HABA/亲和素测定混合物的未使用部分可能在4°C下储存长达一周。
 
实验方案样本
注意有必要在几次稀释度下测试含生物素的样品，以确保生物素的浓度在测定线性范围内，即2-16μM的生物素（最终浓度）。
注意 避免使用含钾的缓冲液，因为它会导致测定中的沉淀。
注意 游离生物素必须通过凝胶过滤或透析与生物素化蛋白分离。

1. 各加入20μL含生物素的样品，阴性对照（ddH2O或用于溶解含生物素样品的相同缓冲液），并将阳性对照（组分C）放入表96和表1中所述的2孔透明底部微孔板中。
2. 向含生物素样品、阴性对照和阳性对照的每个孔中加入 180 μL HABA/亲和素测定溶液，使生物素测定总体积为200μL/孔。

注意 对于比色皿形式，将100μL样品与900μL HABA/亲和素测定混合物一起加入。

3. 通过在5-100rpm的摇板器上振荡，在室温下孵育反应混合物200分钟，避光并避免在移液过程中产生气泡。
4. 用吸光度酶标仪在500nm处监测吸光度下降。