AAT Bioquest YZ-10056 Amplite® Fluorimetric Glutathione GSH/GSSG Ratio Assay Kit *Green Fluorescence*
产品说明：
当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG会积聚，GSH与GSSG的比例会降低。谷胱甘肽还原酶将GSSG回收为GSH，同时氧化b-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐。GSH / GSSG比率的监测和生物样品中GSSG的定量对于评估细胞和组织的氧化还原和解毒状态至关重要，这与谷胱甘肽对氧化和自由基介导的细胞损伤的保护作用有关。有一些试剂或检测试剂盒可用于生物系统中硫醇的定量。然而，所有商业试剂盒要么缺乏灵敏度，要么协议繁琐。我们的 Amplite® 荧光法 GSH/GSSG 比率试剂盒提供了一种超灵敏的检测方法，可定量样品中的 GSH。该试剂盒使用专有的非荧光染料，在与硫醇反应时会发出强烈的荧光。该试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光方法，可在 1 μL 测定体积中检测低至 100 皮摩尔的半胱氨酸或 GSH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行，无需分离步骤即可轻松适应自动化。荧光酶标仪可以轻松读取其信号。
组件
组分A：硫石™绿 1瓶
组分B：检测缓冲液 1 瓶 （25 mL）
组件C：GSH标准 1 瓶 （62 μg）
组件D：二甲基丙烯酸甲醇 1 瓶 （400 μL）
组件E：GSSG探头 1瓶（冻干粉）
组件F：GSSG标准 1 瓶 （124 μg）
示例协议
一目了然
重要提示 关于GSH：GSSG的测定，记住以下等式很重要：
GSSG -> 还原 -> 2 GSSH
对于GSSG的每个氧化还原，产生两摩尔GSH。因此，在数据分析期间确定 [总 GSH] 时，重要的是要记住 [总 GSH] = 2 x [GSSG]。例如，如果特定井的[GSSG]标准为5 uM，则该井的[总GSH]应使用10 uM计算。
协议摘要
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. 谷胱甘肽标准溶液（1 mM）
将 200 μL 检测缓冲液（组分 B）加入 GSH 标准品（组分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSH 标准溶液。
2. GSSG 标准溶液 （1 mM）
加入 200 μL ddH2O 放入 GSSG 标准品（组分 F）的小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSSG 标准溶液。
3. 硫石™绿色储备液（100X）
将 100 μL DMSO（组分 D）加入硫石绿（组分 A）小瓶中，制成 100X 硫石™™绿储备溶液。注意：可以添加 200 μL DMSO 以制成 50 X 硫石™绿色储备溶液，以获得更好的溶解度。
标准溶液的制备
GSH 或 GSSG 标准
制备连续稀释的GSH标准品（0至10μM）：将10μLGSH标准储备溶液加入990μL测定缓冲液（组分B）中，以生成10μM GSH标准溶液（GSH7）。注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。4小时内用完。取10μM GSH标准溶液进行1：2连续稀释，得到5、2.5、1.25、0.625、0.3125和0.1563连续稀释的GSH标准品（GSH6-GSH1）。制备连续稀释的GSSG标准品（0至5μM）：将10μLGSSG标准储备溶液加入990μL测定缓冲液（组分B）中，以产生10 μM GSSG标准溶液。注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。4小时内用完。取10μM GSSG标准溶液进行1：2系列稀释，得到5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.1563和0.0781连续稀释的GSSG标准品（GSSG7-GSSG1）。
工作溶液的制备
1. GSH工作解决方案
将 100 μL 100X 硫石™绿色储备溶液加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，并通过涡旋充分混合。注意：这种GSH工作溶液（GSH-WS）足以用于两个96孔板。常温下不稳定，2小时内应及时使用。注意：避免暴露在光线下。[/注释]
注意 或者，可以通过按比例添加100X硫石™绿储备溶液和测定缓冲液来制备GSH工作溶液。
2. 总GSH工作解决方案
将 5 mL GSH-WS 加入 GSSG 探头（组分 E）瓶中，并通过涡旋充分混合。注意：这种总GSH工作溶液（TGSH-WS）足以用于一个96孔板。常温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免避光。注意：或者，可以通过添加 25 μL ddH 来制作 200X GSSG 探头2O放入组分E的瓶中，然后将储备溶液与GSH-WS按比例混合来制备TGSH-WS。
产品说明：
当细胞暴露于增加的氧化应激水平时，GSSG会积聚，GSH与GSSG的比例会降低。谷胱甘肽还原酶将GSSG回收为GSH，同时氧化b-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸盐。GSH / GSSG比率的监测和生物样品中GSSG的定量对于评估细胞和组织的氧化还原和解毒状态至关重要，这与谷胱甘肽对氧化和自由基介导的细胞损伤的保护作用有关。有一些试剂或检测试剂盒可用于生物系统中硫醇的定量。然而，所有商业试剂盒要么缺乏灵敏度，要么协议繁琐。我们的 Amplite® 荧光法 GSH/GSSG 比率试剂盒提供了一种超灵敏的检测方法，可定量样品中的 GSH。该试剂盒使用专有的非荧光染料，在与硫醇反应时会发出强烈的荧光。该试剂盒提供了一种灵敏的一步荧光方法，可在 1 μL 测定体积中检测低至 100 皮摩尔的半胱氨酸或 GSH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行，无需分离步骤即可轻松适应自动化。荧光酶标仪可以轻松读取其信号。
组件
组分A：硫石™绿 1瓶
组分B：检测缓冲液 1 瓶 （25 mL）
组件C：GSH标准 1 瓶 （62 μg）
组件D：二甲基丙烯酸甲醇 1 瓶 （400 μL）
组件E：GSSG探头 1瓶（冻干粉）
组件F：GSSG标准 1 瓶 （124 μg）
示例协议
一目了然
重要提示 关于GSH：GSSG的测定，记住以下等式很重要：
GSSG -> 还原 -> 2 GSSH
对于GSSG的每个氧化还原，产生两摩尔GSH。因此，在数据分析期间确定 [总 GSH] 时，重要的是要记住 [总 GSH] = 2 x [GSSG]。例如，如果特定井的[GSSG]标准为5 uM，则该井的[总GSH]应使用10 uM计算。
协议摘要
- 制备GSH标准品和/或GSSG标准品或测试样品（50 μL）
- 加入谷胱甘肽工作溶液（50 μL）
- 在室温下孵育 10 至 60 分钟
- 监测Ex/Em = 490/520 nm处的荧光增加
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. 谷胱甘肽标准溶液（1 mM）
将 200 μL 检测缓冲液（组分 B）加入 GSH 标准品（组分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSH 标准溶液。
2. GSSG 标准溶液 （1 mM）
加入 200 μL ddH2O 放入 GSSG 标准品（组分 F）的小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） GSSG 标准溶液。
3. 硫石™绿色储备液（100X）
将 100 μL DMSO（组分 D）加入硫石绿（组分 A）小瓶中，制成 100X 硫石™™绿储备溶液。注意：可以添加 200 μL DMSO 以制成 50 X 硫石™绿色储备溶液，以获得更好的溶解度。
标准溶液的制备
GSH 或 GSSG 标准
制备连续稀释的GSH标准品（0至10μM）：将10μLGSH标准储备溶液加入990μL测定缓冲液（组分B）中，以生成10μM GSH标准溶液（GSH7）。注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。4小时内用完。取10μM GSH标准溶液进行1：2连续稀释，得到5、2.5、1.25、0.625、0.3125和0.1563连续稀释的GSH标准品（GSH6-GSH1）。制备连续稀释的GSSG标准品（0至5μM）：将10μLGSSG标准储备溶液加入990μL测定缓冲液（组分B）中，以产生10 μM GSSG标准溶液。注意：稀释的GSSG标准溶液不稳定。4小时内用完。取10μM GSSG标准溶液进行1：2系列稀释，得到5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.1563和0.0781连续稀释的GSSG标准品（GSSG7-GSSG1）。
工作溶液的制备
1. GSH工作解决方案
将 100 μL 100X 硫石™绿色储备溶液加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，并通过涡旋充分混合。注意：这种GSH工作溶液（GSH-WS）足以用于两个96孔板。常温下不稳定，2小时内应及时使用。注意：避免暴露在光线下。[/注释]
注意 或者，可以通过按比例添加100X硫石™绿储备溶液和测定缓冲液来制备GSH工作溶液。
2. 总GSH工作解决方案
将 5 mL GSH-WS 加入 GSSG 探头（组分 E）瓶中，并通过涡旋充分混合。注意：这种总GSH工作溶液（TGSH-WS）足以用于一个96孔板。常温下不稳定，应在2小时内及时使用，避免避光。注意：或者，可以通过添加 25 μL ddH 来制作 200X GSSG 探头2O放入组分E的瓶中，然后将储备溶液与GSH-WS按比例混合来制备TGSH-WS。