产品说明:
氨是生命系统氮的重要来源。它是通过氨基酸代谢合成的,在高浓度下存在时是有毒的。它在肝脏中产生,并通过尿素循环转化为尿素。在肝功能障碍(肝硬化)中发现血液中氨水平升高(高氨血症),而低氨血症与尿素循环酶(例如鸟氨酸转氨甲酰酶)缺陷有关。氨的测定是临床实验室中监测健康状况非常有用的测试。我们的Amplite®比色氨检测试剂盒提供了一种简单灵敏的比色法,用于定量食品和生物样品(如血清、血浆和尿液等)中的氨浓度。该测定基于测定缓冲液中氨的酶偶联反应,最终产生蓝色产品。产生的颜色强度与样品中氨的浓度成正比,可以在660-670nm处比色测量。该Amplite®比色氨检测试剂盒提供了一种简单的检测氨的检测方法。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行,无需分离步骤即可轻松适应自动化。
组件
组分A:检测缓冲液I 1 瓶 (10 mL)
组分B:检测缓冲液II 1 瓶 (10 mL)
组分C:*化铵标准品(1.0 M) 1 瓶 (0.2 毫升)
示例协议
一目了然
协议摘要
重要说明
在开始实验之前,将所有试剂盒组分解冻至室温。
标准溶液的制备
*化铵标准品
将 1 μL 1.0 M *化铵标准品(组分 C)加入 999 μL DPBS 中,生成 1000 μM *化铵标准溶液 (AS7)。取1000μM*化铵标准溶液(AS7)并进行1:3系列稀释,得到用DPBS连续稀释的*化铵标准品(AS6 - AS1)。
实验方案样本
表 1.*化铵标准品和测试样品在透明底部96孔微孔板中的布局。AS=*化铵标准品(AS1 - AS7,1至1000μM),BL=空白对照,TS=测试样品。
提单 提单 TS TS
AS1 AS1 ... ...
AS2 AS2 ... ...
AS3 AS3
AS4 AS4
AS5 AS5
AS6 AS6
AS7 AS7
表 2.每个孔的试剂组成。
井 卷 试剂
AS1 - AS7 50 微升 连续稀释(1 至 1000 μM)
提单 50 微升 DPBS
TS 50 微升 测试样品
氨是生命系统氮的重要来源。它是通过氨基酸代谢合成的,在高浓度下存在时是有毒的。它在肝脏中产生,并通过尿素循环转化为尿素。在肝功能障碍(肝硬化)中发现血液中氨水平升高(高氨血症),而低氨血症与尿素循环酶(例如鸟氨酸转氨甲酰酶)缺陷有关。氨的测定是临床实验室中监测健康状况非常有用的测试。我们的Amplite®比色氨检测试剂盒提供了一种简单灵敏的比色法,用于定量食品和生物样品(如血清、血浆和尿液等)中的氨浓度。该测定基于测定缓冲液中氨的酶偶联反应,最终产生蓝色产品。产生的颜色强度与样品中氨的浓度成正比,可以在660-670nm处比色测量。该Amplite®比色氨检测试剂盒提供了一种简单的检测氨的检测方法。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行,无需分离步骤即可轻松适应自动化。
组件
组分A:检测缓冲液I 1 瓶 (10 mL)
组分B:检测缓冲液II 1 瓶 (10 mL)
组分C:*化铵标准品(1.0 M) 1 瓶 (0.2 毫升)
示例协议
一目了然
协议摘要
- 制备*化铵标准品或测试样品(50 μL)
- 添加检测缓冲液 I (50 μL)
- 在室温或 37°C 下孵育 5 分钟
- 添加检测缓冲液 II (50 μL)
- 在室温下孵育 30 - 60 分钟
- 监测 660 - 670 nm 处的吸光度增加
重要说明
在开始实验之前,将所有试剂盒组分解冻至室温。
标准溶液的制备
*化铵标准品
将 1 μL 1.0 M *化铵标准品(组分 C)加入 999 μL DPBS 中,生成 1000 μM *化铵标准溶液 (AS7)。取1000μM*化铵标准溶液(AS7)并进行1:3系列稀释,得到用DPBS连续稀释的*化铵标准品(AS6 - AS1)。
实验方案样本
表 1.*化铵标准品和测试样品在透明底部96孔微孔板中的布局。AS=*化铵标准品(AS1 - AS7,1至1000μM),BL=空白对照,TS=测试样品。
提单 提单 TS TS
AS1 AS1 ... ...
AS2 AS2 ... ...
AS3 AS3
AS4 AS4
AS5 AS5
AS6 AS6
AS7 AS7
表 2.每个孔的试剂组成。
井 卷 试剂
AS1 - AS7 50 微升 连续稀释(1 至 1000 μM)
提单 50 微升 DPBS
TS 50 微升 测试样品
- 根据表1和表2中提供的布局制备*化铵标准品(AS)、空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于 384 孔板,每孔使用 25 μL 试剂而不是 50 μL。
- 向*化铵标准品、空白对照和测试样品的每个孔中加入 50 μL 检测缓冲液 I(组分 A),使总检测体积为 100 μL/孔。对于 384 孔板,向每个孔中加入 25 μL 检测缓冲液 I,总体积为 50 μL/孔。
- 将反应在室温或 37°C 下孵育 5 分钟。
- 向每个孔中加入 50 μL 检测缓冲液 II(组分 B),使总检测体积为 150 μL/孔。对于 384 孔板,向每个孔中加入 25 μL 检测缓冲液 II,总体积为 75 μL/孔。
- 将反应在室温下孵育30-60分钟。
- 用吸光度酶标仪在660 - 670nm处监测吸光度增加。注意:加入测定缓冲液II(组分B)后颜色变为黄色,含有*化铵标准品或样品的孔在孵育后将显示蓝绿色。颜色的强度将在30-60分钟内达到最大值。