产品说明：
丙二醛（MDA）是脂质过氧化的天然副产物，被广泛用作确定氧化应激和自由基形成的关键指标。MDA的测量历来依赖于与硫代巴比妥酸（TBA）的反应，以产生可以通过比色法或荧光法测量的化合物。但该测定不是MDA特有的，也可以在90-100°C的酸性条件下进行。 已经有许多商业ELISA试剂盒，这使得它更加昂贵和乏味。Amplite® 比色丙二醛 （MDA） 定量试剂盒提供了最快速、最方便的 MDA 测量方法，无需 TBAR 加热步骤。MDA蓝色与MDA反应生成蓝色™产物，用吸光度酶标仪在695nm处测量。该测定非常快速且对MDA具有特异性，几乎不受其他醛类的干扰。
 
组件
 
组件 A：MDA 蓝色™  1瓶
组分B：稀释缓冲液     1 瓶 （10 mL）
组件C：MDA标准 1瓶（冻干粉）
组分D：反应溶液  1 瓶 （10 mL）
 
示例协议
 
一目了然
协议摘要
 

1. 制备测试样品以及连续稀释的MDA标准品（50 μL）
2. 加入 MDA 蓝色™储备溶液 （10 μL）
3. 在室温下孵育 10 - 30 分钟
4. 加入反应溶液 （40 μL）
5. 监测 695 nm 处的外径增加

 
重要说明
在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
 
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. MDA标准溶液（100 mM）：
加入100 μL ddH2O放入MDA标准小瓶（组分C）中，制成100 mM MDA储备溶液。
 
标准溶液的制备
MDA标准
 
将 4 μL 100 mM MDA 标准品加入 996 μL 稀释缓冲液（组分 B）中，得到 400 μM MDA 溶液 （MDA7）。然后在稀释缓冲液中进行1：2连续稀释，以获得连续稀释的MDA标准品（MDA6 - MDA1）。
 
实验方案样本
表 1.MDA标准品和测试样品在96孔透明底部微孔板中的布局。MDA=MDA标准品（MDA1 - MDA7，6.25至400μM），BL=空白对照，TS=测试样品。
 
提单     提单     TS  TS
MDA1  MDA1  ...   ...
MDA2  MDA2  ...   ...
MDA3  MDA3       
MDA4  MDA4       
MDA5  MDA5       
MDA6  MDA6       
MDA7  MDA7       
表 2.每个孔的试剂组成。
 
井  卷  试剂
MDA1 - MDA7     50 微升     连续稀释（6.25 至 400 μM）
提单     50 微升     稀释缓冲液（组分B）
TS  50 微升     测试样品
 

1. 根据表1和表2中提供的布局制备MDA标准品（MDA），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂而不是 50 μL。

 

2. 将 10 μL MDA 蓝™（组分 A）溶液添加到 MDA 标准品、空白对照和测试样品的每个孔中。对于 384 孔板，在每个孔中使用 5 μL MDA 蓝色™溶液。

 

3. 将反应混合物在室温下孵育10-30分钟。

 

4. 加入 40 μL 反应溶液（组分 D），使总测定体积为 100 μL/孔。对于 384 孔板，使用 20 μL 反应溶液，总测定体积为 50 μL/孔。

 

5. 将最终反应混合物在室温下孵育30-60分钟。

 

6. 使用吸光度读数仪监测吸光度增加，在OD为695~700nm处进行路径检查校正。