产品说明：
过氧化*（H2O2）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多与哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、骨质疏松症、许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物事件。也许H2O2生物学最有趣的方面是最近的报道，即抗体具有将分子氧转化为过氧化*的能力，有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种反应性物质将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。Amplite 过氧化*检测试剂盒使用我们的 Amplite®® Red 过氧化物酶底物来定量溶液和细胞提取物中的过氧化*。它还可用于通过酶偶联反应检测各种氧化酶活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读取”检测，与 HTS 液体处理仪器兼容。
组件
组分A：安培™红过氧化物酶底物 1瓶
组分B：H2O2 1 瓶（3% 稳定溶液，200 μL）
组分C：检测缓冲液 1 瓶 （100 mL）
组分D：辣根过氧化物酶 1瓶（20单位）
构成部分E：DMSO 1 瓶 （1 mL）
示例协议
一目了然
协议摘要
重要说明
在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒成分。
重要说明
组分A在DTT和β-巯基乙*等硫醇存在下不稳定。硫醇高于10 uM（终浓度）会显著降低测定动态范围。
重要说明
NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰测定。
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite Red 过氧化物酶底物储备溶液 （100X）：
将 250 μL DMSO（组分 E）加入到小瓶的 Amplite™™ Red 底物（组分 A）中。应及时使用此储备溶液。
2.过氧化物酶储备溶液（20 U / mL）：
将1 mL测定缓冲液（组分C）加入辣根过氧化物酶（组分D）小瓶中。
3. H2O2标准溶液 （20 mM）：
加入22.7 μL 的3% H2O2（0.88 M，组分B）放入977μL检测缓冲液（组分 C）中。注意：稀释的H2O2溶液不稳定。任何未使用的部分都应丢弃。
标准溶液的制备
H2O2 标准
加入 1μL20 mM H2O2将溶液储备到1999μL测定缓冲液（组分C）中，以获得 10μM H2O2标准 （HS7）。取10μM H2O2标准并进行 1：3 系列稀释以获得 H 的连续稀释液2O2标准（HS6 - HS1）。
工作溶液的制备
将50μL Amplite™ 红色过氧化物酶底物储备溶液（100X）和200μL 过氧化物酶储备溶液（20 U/mL）加入4.75 mL检测缓冲液（组分 C）中，使总体积为 5mL。注意：避光保存。
实验方案样本
H2O2上清液测定
H2O2细胞检测
Amplite™荧光过氧化*检测试剂盒可用于测量H的释放2O2从细胞。以下是建议的方案，可以修改以满足特定的研究需求。
| 激发（纳米） | 发射（纳米） |
| 571 | 584 |
过氧化*（H2O2）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多与哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、骨质疏松症、许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物事件。也许H2O2生物学最有趣的方面是最近的报道，即抗体具有将分子氧转化为过氧化*的能力，有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种反应性物质将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。Amplite 过氧化*检测试剂盒使用我们的 Amplite®® Red 过氧化物酶底物来定量溶液和细胞提取物中的过氧化*。它还可用于通过酶偶联反应检测各种氧化酶活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读取”检测，与 HTS 液体处理仪器兼容。
组件
组分A：安培™红过氧化物酶底物 1瓶
组分B：H2O2 1 瓶（3% 稳定溶液，200 μL）
组分C：检测缓冲液 1 瓶 （100 mL）
组分D：辣根过氧化物酶 1瓶（20单位）
构成部分E：DMSO 1 瓶 （1 mL）
示例协议
一目了然
协议摘要
- 准备 H2O2工作溶液 （50 μL）
- 添加 H2O2标准品或测试样品 （50 μL）
- 在室温下孵育 10 - 30 分钟
- 监测Ex/Em = 540/590 nm处的荧光强度
重要说明
在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒成分。
重要说明
组分A在DTT和β-巯基乙*等硫醇存在下不稳定。硫醇高于10 uM（终浓度）会显著降低测定动态范围。
重要说明
NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰测定。
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite Red 过氧化物酶底物储备溶液 （100X）：
将 250 μL DMSO（组分 E）加入到小瓶的 Amplite™™ Red 底物（组分 A）中。应及时使用此储备溶液。
2.过氧化物酶储备溶液（20 U / mL）：
将1 mL测定缓冲液（组分C）加入辣根过氧化物酶（组分D）小瓶中。
3. H2O2标准溶液 （20 mM）：
加入22.7 μL 的3% H2O2（0.88 M，组分B）放入977μL检测缓冲液（组分 C）中。注意：稀释的H2O2溶液不稳定。任何未使用的部分都应丢弃。
标准溶液的制备
H2O2 标准
加入 1μL20 mM H2O2将溶液储备到1999μL测定缓冲液（组分C）中，以获得 10μM H2O2标准 （HS7）。取10μM H2O2标准并进行 1：3 系列稀释以获得 H 的连续稀释液2O2标准（HS6 - HS1）。
工作溶液的制备
将50μL Amplite™ 红色过氧化物酶底物储备溶液（100X）和200μL 过氧化物酶储备溶液（20 U/mL）加入4.75 mL检测缓冲液（组分 C）中，使总体积为 5mL。注意：避光保存。
实验方案样本
H2O2上清液测定
- 准备 H2O2根据表96和表1中提供的布局，将标准品（HS）、空白对照（BL）和测试样品（TS）放入纯黑色2孔微孔板中。对于384孔板，每孔使用25μL 试剂而不是50μL。
- 加入 50 μL H2O2工作溶液进入H的每个孔中2O2标准、空白对照和测试样品，使总H2O2测定体积为100μL/孔。对于384孔板，加入25μL H2O2相反，工作溶液的总体积为50μL/孔。
- 将反应在室温下孵育15至30分钟，避光。
- 使用荧光酶标仪在激发= 540±10 nm，发射= 590±10 nm（最佳Ex / Em = 540/590 nm）监测荧光增加。注意：板的内容物也可以转移到白色透明底部微孔板中，并由吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读取。然而，与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。
H2O2细胞检测
Amplite™荧光过氧化*检测试剂盒可用于测量H的释放2O2从细胞。以下是建议的方案，可以修改以满足特定的研究需求。
- The H2O2细胞工作溶液应按上述方式制备，但应用细胞培养系统中使用的培养基替换检测缓冲液（组分C）。建议的培养基包括（a）克雷布斯林格斯磷酸盐缓冲液（KRPB）;（b） 汉克斯平衡盐溶液;或 （c） 无血清培养基。
- 在96孔板（50 - 100μL/孔）中制备细胞，并根据需要激活细胞。注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。对于384孔板，改用25μL/孔的细胞培养基。
- 加入50μL H2O2细胞工作溶液进入每个细胞孔和H2O2标准。对于384孔板，加入25μL H2O2将细胞工作溶液改为放入每个孔中。
- 将反应在室温下孵育15至30分钟，避光。
- 使用荧光酶标仪在激发= 540±10 nm，发射= 590±10 nm（最佳Ex /Em = 540/590 nm）监测荧光增加。