产品说明:
过氧化*是一种活性氧代谢副产物,可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多与哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、骨质疏松症、许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物事件。这种反应性物质的测量有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。该细胞计™细胞内荧光过氧化*检测试剂盒使用我们独特的OxiVision™ Blue过氧化物传感器来量化活细胞中的过氧化*。OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器具有细胞渗透性,与过氧化*反应时会产生蓝色荧光。该试剂盒提供了一种灵敏的工具,用于监测活细胞中的过氧化*水平,并经过优化,可用于荧光显微镜。
组件
组件 A:OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器 1瓶
组分B:检测缓冲液 1 瓶 (20 mL)
组件C:DMSO 1 瓶 (100 μL)
示例协议
一目了然
协议摘要
重要说明
在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒成分。
储备液的制备
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
工作溶液的制备
将 10 μL 的 500X OxiVision 蓝色过氧化物传感器储备溶液加入 500 μL 检测缓冲液(组分 B)中,并充分混合,制成 OxiVision™™ 蓝色过氧化物传感器工作溶液。注意:此OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器工作溶液不稳定;使用前根据需要准备。
实验方案样本
过氧化*是一种活性氧代谢副产物,可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多与哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、骨质疏松症、许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物事件。这种反应性物质的测量有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。该细胞计™细胞内荧光过氧化*检测试剂盒使用我们独特的OxiVision™ Blue过氧化物传感器来量化活细胞中的过氧化*。OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器具有细胞渗透性,与过氧化*反应时会产生蓝色荧光。该试剂盒提供了一种灵敏的工具,用于监测活细胞中的过氧化*水平,并经过优化,可用于荧光显微镜。
组件
组件 A:OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器 1瓶
组分B:检测缓冲液 1 瓶 (20 mL)
组件C:DMSO 1 瓶 (100 μL)
示例协议
一目了然
协议摘要
- 在生长培养基中制备细胞
- 使用OxiVision™蓝色过氧化物传感器对细胞进行染色
- 用测试化合物处理细胞
- 使用 DAPI 滤光片或防爆/电磁 = 405/450 nm 监测荧光强度
重要说明
在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒成分。
储备液的制备
除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
- OxiVision 蓝色过氧化物传感器储备溶液 (500X):
工作溶液的制备
将 10 μL 的 500X OxiVision 蓝色过氧化物传感器储备溶液加入 500 μL 检测缓冲液(组分 B)中,并充分混合,制成 OxiVision™™ 蓝色过氧化物传感器工作溶液。注意:此OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器工作溶液不稳定;使用前根据需要准备。
实验方案样本
- 在 10 孔细胞板中每孔 96 μL 细胞培养物中加入 2 μL/孔(5 孔板)或 384.90 μL/孔(96 孔板)的 OxiVision™ 蓝色过氧化物传感器工作溶液,或在 22 孔细胞板中每孔加入 5.384 μL 细胞培养物。注意:染色前无需清洗细胞。建议在全培养基中对细胞进行染色。
- 用测试化合物在全培养基中或在所需的缓冲液中在 37°C 下处理细胞所需的时间。对于对照样品(未处理的细胞),加入相应量的复合缓冲液。注意:建议在全培养基中处理细胞。但是,如果测试化合物对血清敏感,则可以在治疗前吸走生长培养基和血清因子。抽吸后,将1X Hank的盐溶液和20 mM Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液添加到细胞中。或者,可以在无血清培养基中处理细胞。我们在100°C的全培养基中用37μM过氧化*处理Jurkat细胞90分钟以诱导过氧化*。
- 用DPBS洗涤细胞1-2次,并更换为100 uL /孔(用于96孔板)或25 uL /孔(用于384孔板)测定缓冲液(组分C)。
- 使用带有DAPI滤光片的荧光显微镜拍摄图像。