产品说明：
过氧化物酶是一种小分子（MW ~40 KD），通常可以以4：1的比例与抗体偶联。由于其体积小，它很少引起抗体/抗原复合物形成的空间位阻问题。与其他标记酶相比，过氧化物酶价格低廉。与过氧化物酶相关的主要缺点是它们对许多防腐剂（例如叠***）的耐受性低，即使在低浓度下也能使过氧化物酶活性失活。HRP 偶联物可广泛用于 ELISA、免疫组织化学技术以及北部、南部和西部印迹分析中的二级检测试剂。我们在一步法、均质、无洗涤检测系统中提供这种快速（10 分钟）HRP 检测。该试剂盒可用于 ELISA、表征酶反应动力学和氧化酶抑制剂的高通量筛选等。该试剂盒提供优化的“混合和读取”检测方案，与 HTS 液体处理仪器兼容。
平台
吸光度酶标仪
吸光度 576 ±5 纳米
推荐板 清除底部
荧光酶标仪
Excitation 540 纳米
Emission 590 纳米
Cutoff 575 纳米
推荐板 纯黑色
组件
组分A：Amplite™红过氧化物酶底物 1瓶
组分B：H2O2 1 瓶（3% 稳定溶液，200 μL）
组分C：检测缓冲液 1 瓶 （100 mL）
组分D：辣根过氧化物酶 1瓶（20单位）
构成部分E：DMSO 1 瓶 （0.5 mL）
示例协议
一目了然
协议摘要
重要事项 在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。组分A在DTT和β-巯基乙*等硫醇存在下不稳定。浓度高于10μM的硫醇的存在会显着降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰测定。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite™ 红过氧化物酶底物储备溶液 （100X）
将 250 μL DMSO（组分 E）加入到安培红色过氧化物酶底物（组分 A）的小瓶中，制成 100X Amplite ™™红过氧化物酶底物储备溶液。应及时使用储备溶液。避光保存。
2. HRP 标准溶液 （20 U/mL）
将 1 mL 测定缓冲液（组分 C）加入辣根过氧化物酶（组分 D）小瓶中，制成 20 U/mL HRP 标准溶液。
3. H2O2储备溶液 （20 mM）
加入 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，组分 B）放入 977 μL 检测缓冲液（组分 C）中，制成 20 mM H2O2储备液 .注意：稀释后的 H2O2溶液不稳定。未使用的部分应丢弃。
标准溶液的制备
人力资源生产标准
在 1 μL 测定缓冲液（组分 C）中加入 20 μL 1999 U/mL HRP 标准溶液，得到 10 mU/mL HRP 标准溶液 （SD7）。取 10 mU/mL HRP 标准溶液 （SD7） 并进行 1：3 连续稀释，以获得带有测定缓冲液（组分 C）的连续稀释的 HRP 标准品 （SD6 - SD1）。
工作溶液的制备
加入 50 μL 100X Amplite™ 红色过氧化物酶底物储备溶液和 50 μL 20 mM H2O2将溶液储备到 4.9 mL 的测定缓冲液（组分 C）中，制成 HRP 工作溶液。避光保存。
实验方案样本
表 1. HRP标准品和测试样品在纯黑色96孔微孔板中的布局。SD= HRP 标准品（SD1 - SD7，0.01 至 10 mU/mL）;BL=空白控件;TS=测试样品。
表 2. 每个孔的试剂组成。
| 激发（纳米） | 发射（纳米） |
| 571 | 584 |
过氧化物酶是一种小分子（MW ~40 KD），通常可以以4：1的比例与抗体偶联。由于其体积小，它很少引起抗体/抗原复合物形成的空间位阻问题。与其他标记酶相比，过氧化物酶价格低廉。与过氧化物酶相关的主要缺点是它们对许多防腐剂（例如叠***）的耐受性低，即使在低浓度下也能使过氧化物酶活性失活。HRP 偶联物可广泛用于 ELISA、免疫组织化学技术以及北部、南部和西部印迹分析中的二级检测试剂。我们在一步法、均质、无洗涤检测系统中提供这种快速（10 分钟）HRP 检测。该试剂盒可用于 ELISA、表征酶反应动力学和氧化酶抑制剂的高通量筛选等。该试剂盒提供优化的“混合和读取”检测方案，与 HTS 液体处理仪器兼容。
平台
吸光度酶标仪
吸光度 576 ±5 纳米
推荐板 清除底部
荧光酶标仪
Excitation 540 纳米
Emission 590 纳米
Cutoff 575 纳米
推荐板 纯黑色
组件
组分A：Amplite™红过氧化物酶底物 1瓶
组分B：H2O2 1 瓶（3% 稳定溶液，200 μL）
组分C：检测缓冲液 1 瓶 （100 mL）
组分D：辣根过氧化物酶 1瓶（20单位）
构成部分E：DMSO 1 瓶 （0.5 mL）
示例协议
一目了然
协议摘要
- 制备 HRP 标准品和/或测试样品 （50 μL）
- 加入 HRP 工作溶液 （50 μL）
- 在室温下孵育 10 - 30 分钟
- 在Ex/Em = 540/590 nm（截止值= 575 nm）下监测荧光强度
重要事项 在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。组分A在DTT和β-巯基乙*等硫醇存在下不稳定。浓度高于10μM的硫醇的存在会显着降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰测定。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite™ 红过氧化物酶底物储备溶液 （100X）
将 250 μL DMSO（组分 E）加入到安培红色过氧化物酶底物（组分 A）的小瓶中，制成 100X Amplite ™™红过氧化物酶底物储备溶液。应及时使用储备溶液。避光保存。
2. HRP 标准溶液 （20 U/mL）
将 1 mL 测定缓冲液（组分 C）加入辣根过氧化物酶（组分 D）小瓶中，制成 20 U/mL HRP 标准溶液。
3. H2O2储备溶液 （20 mM）
加入 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，组分 B）放入 977 μL 检测缓冲液（组分 C）中，制成 20 mM H2O2储备液 .注意：稀释后的 H2O2溶液不稳定。未使用的部分应丢弃。
标准溶液的制备
人力资源生产标准
在 1 μL 测定缓冲液（组分 C）中加入 20 μL 1999 U/mL HRP 标准溶液，得到 10 mU/mL HRP 标准溶液 （SD7）。取 10 mU/mL HRP 标准溶液 （SD7） 并进行 1：3 连续稀释，以获得带有测定缓冲液（组分 C）的连续稀释的 HRP 标准品 （SD6 - SD1）。
工作溶液的制备
加入 50 μL 100X Amplite™ 红色过氧化物酶底物储备溶液和 50 μL 20 mM H2O2将溶液储备到 4.9 mL 的测定缓冲液（组分 C）中，制成 HRP 工作溶液。避光保存。
实验方案样本
表 1. HRP标准品和测试样品在纯黑色96孔微孔板中的布局。SD= HRP 标准品（SD1 - SD7，0.01 至 10 mU/mL）;BL=空白控件;TS=测试样品。
| 提单 | 提单 | TS | TS |
| SD1 | SD1 | --- | --- |
| SD2 | SD2 | --- | --- |
| SD3 | SD3 | ||
| SD4 | SD4 | ||
| SD5 | SD5 | ||
| SD6 | SD6 | ||
| SD7 | SD7 |
表 2. 每个孔的试剂组成。
| 井 | 卷 | 试剂 |
| SD1 - SD7 | 50 微升 | 连续稀释（0.01 至 10 mU/mL） |
| 提单 | 50 微升 | 检测缓冲液（组分C） |
| TS | 50 微升 | 测试样品 |
- 根据表1和表2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂而不是 50 μL。 注意：高水平的 HRP（例如，>100 mU/mL 最终浓度）可能会由于 Amplite™ Red 的过度氧化（到非荧光灯）而导致荧光信号降低。
- 向HRP标准品、空白对照和测试样品的每个孔中加入50 μL HRP工作溶液，使HRP测定总体积为100 μL/孔。对于 384 孔板，向每个孔中加入 25 μL HRP 工作溶液，总体积为 50 μL/孔。
- 将反应在室温下孵育10至30分钟，避光。
- 使用荧光板读数器在激发= 540±10nm，发射= 590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590 nm，截止= 575 nm）监测荧光增加。注意：板的内容物也可以转移到白色透明底板上，并由吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读取。与荧光读数相比，吸收检测的灵敏度较低。