产品说明：
        乳酸是手性的，具有两种光学异构体：L-乳酸和D-乳酸。乳酸在新陈代谢和运动过程中通过乳酸脱氢酶（LDH）不断由**酸产生。监测乳酸水平是评估组织需氧量和利用量之间平衡的好方法，在研究细胞和动物生理学时很有用。D-乳酸不被哺乳动物代谢，其从体内消除主要取决于肾脏排泄。D-和L-乳酸存在于许多发酵乳制品中，如酸奶和奶酪，也存在于腌制蔬菜和腌制肉类和鱼类中。D-和L-乳酸（由细菌产生）是食物的质量指标，如鸡蛋、牛奶、果汁和葡萄酒。血液中异常高浓度的D-乳酸通常反映了胃肠道中细菌过度生长。亚洲空运中心Bioquest的Amplite®乳酸检测试剂盒（L-乳酸检测的Cat#13814和13815，D-乳酸检测的Cat#13810和13811）提供基于荧光和吸光度的方法，用于检测血清、血浆、尿液等生物样品以及细胞培养样品中的L-乳酸或D-乳酸。在酶偶联测定中，乳酸与NADH成比例相关，NADH由显色NADH传感器特异性监测。吸光度酶标仪可以在~A575nm/A605nm的吸光度比下轻松读取该信号，以提高测定灵敏度。使用这种比色Amplite ® L-乳酸检测试剂盒，我们能够在 4 μL 反应体积中检测到低至 100 μM 的 L-乳酸。
 
平台
吸光度酶标仪
吸光度  575/605 纳米
推荐板  清除底部
 
组件
组分A：酶探针      2瓶（冻干粉）
组分B：检测缓冲液     1 瓶 （10 mL）
组件 C：NAD  1瓶
组分D：L-乳酸标准品  2.25毫克/瓶
 
示例协议
 
一目了然
协议摘要

1. 制备L-乳酸标准品或测试样品（50 μL）
2. 加入L-乳酸工作溶液（50μL）
3. 在室温下孵育30分钟 - 2小时
4. 监测吸光度比在A处增加575纳米/一个605纳米

 
重要 在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一瓶。
 
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
 
1. NAD储备液（100X）
加入 100 μL H2O放入NAD（组分C）的小瓶中，制成100X NAD储备溶液。
 
2. L-乳酸标准溶液（100 mM）
加入 200 μL H2O或1x PBS缓冲液放入L-乳酸标准品（组分D）的小瓶中，制成100mM L-乳酸标准溶液。
 
标准溶液的制备
L-乳酸标准品
将 10 μL 100 mM L-乳酸标准溶液加入 990 μL 1xPBS 缓冲液中，生成 1 mM L-乳酸标准溶液 （SD7）。取1 mM L-乳酸标准溶液（SD7），在1xPBS缓冲液中进行3：1连续稀释，以获得连续稀释的L-乳酸标准品（SD6 - SD1）。注意：稀释的L-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
 
工作溶液的制备

1. 将 5 mL 检测缓冲液（组分 B）加入一瓶酶探针（组分 A）中，并充分混合。
2. 将 50 μL 100X NAD 储备溶液加入组分 A+B 的瓶中，充分混合制成 L-乳酸工作溶液。

注意 这种L-乳酸工作溶液足以用于一个96孔板。不稳定，应在2小时内及时使用。避免暴露在光线下。
注意 或者，可以通过将 50 μL H 100 O 加入酶混合物瓶（组分 A）中来制备 2X 的 L-乳酸酶储备溶液，然后将储备溶液与测定缓冲液（组分 B）和 100X NAD 储备溶液按比例混合来制备 L-乳酸工作溶液。
 
实验方案样本
表 1. L-乳酸标准品和测试样品在白色透明底部96孔微孔板中的布局。SD=L-乳酸标准品（SD1 - SD7，1至1000μM），BL=空白对照，TS=测试样品。
 

提单	提单	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

 





表 2. 每个孔的试剂组成。

 

井	卷	试剂
SD1 - SD7	50 微升	连续稀释（1 至 1000 μM）
提单	50 微升	稀释缓冲液
TS	50 微升	测试样品

 

1. 根据表1和表2中提供的布局制备L-乳酸标准品（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂而不是 50 μL。
2. 向L-乳酸标准品、空白对照和测试样品的每个孔中加入50 μL L-乳酸工作溶液，使L-乳酸测定总体积为100μL/孔。对于 384 孔板，向每个孔中加入 25 μL L-乳酸工作溶液，总体积为 50 μL/孔。
3. 将反应物在室温下孵育30分钟至2小时，避光。
4. 用吸光板读数仪在A处监测吸光度比增加575纳米/一个605纳米.