产品说明：
烟xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和烟xian胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是细胞中发现的两种重要的辅助因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代谢生物反应，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作为还原剂。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定是通过监测340nm处的NADH或NADPH吸收来完成的。该方法灵敏度低，干扰高，因为测定是在需要昂贵的石英微孔板的紫外范围内进行的。我们的 Amplite® NAD/NADH 比率检测试剂盒为灵敏检测 NAD、NADH 及其比率提供了一种方便的方法。NADH探针是一种显色传感器，在NADH还原时在~460nm处具有最大吸光度。~460nm处的吸光度增加与溶液中NADH的浓度成正比。NADH探针可以在无酶反应中识别NADH，并且吸光度酶标仪可以在~460nm处轻松读取信号。Amplite® 比色 NADH 检测试剂盒提供灵敏的检测方法，可在 3 μL 检测体积中检测低至 100 μM NADH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行。
平台
吸光度酶标仪
吸光度 460 纳米
推荐板 清除底部
组件
组分A：NAD/NADH回收酶混合物 2瓶（冻干粉）
组件 B-I：NADH 探头 1 瓶 （4 mL）
组件 B-II：NADH 探针缓冲液 1 瓶 （16 mL）
组件C：NADH标准（FW：709） 1 瓶 （142 μg）
组分D：NAD提取溶液 1 瓶 （10 mL）
组分E：中和溶液 1 瓶 （10 mL）
组件F：提取控制解决方案 1 瓶 （10 mL）
组分G：裂解缓冲液 1 瓶 （10 mL）
一目了然
协议摘要
强烈建议在37°C下用裂解缓冲液（组分G）孵育细胞，并使用上清液进行实验。
在开始实验之前，在室温下解冻每种试剂盒组分之一。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环
NADH 标准溶液 （1 mM）
将 200 μL 1X PBS 缓冲液加入 NADH 标准品（组分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） NADH 标准溶液。
标准溶液的制备
NADH标准
将 50 μL 1 mM （1 nmol/μL） NADH 标准溶液加入 450 μL 1X PBS 缓冲液 （pH 7.4） 中，生成 100 μM （100 pmols/μL） NADH 标准溶液。然后取100μM NADH标准溶液，在1X PBS缓冲液中进行2：1连续稀释，以获得连续稀释的NADH标准品（NS1 - NS7）。注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
工作溶液的制备
将 8 mL NADH 探针缓冲液（组分 B-II）加入 NAD/NADH 回收酶混合物（组分 A）瓶中，并充分混合。
将 2 mL NADH 探针（组分 B-I）加入组件 A+B-II 的瓶中，充分混合制成 NAD/NADH 工作溶液。
注意 这种NAD / NADH工作溶液足以进行125-200次测定。工作溶液不稳定，及时使用，避免直接暴露在光线下。
注意 可以尝试使用ddH 2 O（例如500 uL）溶解组分A，然后按比例与B-II和B-I混合，以使NAD / NADH工作溶液仅供充分使用。
烟xian胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和烟xian胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是细胞中发现的两种重要的辅助因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代谢生物反应，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作为还原剂。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定是通过监测340nm处的NADH或NADPH吸收来完成的。该方法灵敏度低，干扰高，因为测定是在需要昂贵的石英微孔板的紫外范围内进行的。我们的 Amplite® NAD/NADH 比率检测试剂盒为灵敏检测 NAD、NADH 及其比率提供了一种方便的方法。NADH探针是一种显色传感器，在NADH还原时在~460nm处具有最大吸光度。~460nm处的吸光度增加与溶液中NADH的浓度成正比。NADH探针可以在无酶反应中识别NADH，并且吸光度酶标仪可以在~460nm处轻松读取信号。Amplite® 比色 NADH 检测试剂盒提供灵敏的检测方法，可在 3 μL 检测体积中检测低至 100 μM NADH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行。
平台
吸光度酶标仪
吸光度 460 纳米
推荐板 清除底部
组件
组分A：NAD/NADH回收酶混合物 2瓶（冻干粉）
组件 B-I：NADH 探头 1 瓶 （4 mL）
组件 B-II：NADH 探针缓冲液 1 瓶 （16 mL）
组件C：NADH标准（FW：709） 1 瓶 （142 μg）
组分D：NAD提取溶液 1 瓶 （10 mL）
组分E：中和溶液 1 瓶 （10 mL）
组件F：提取控制解决方案 1 瓶 （10 mL）
组分G：裂解缓冲液 1 瓶 （10 mL）
一目了然
协议摘要
- 准备 25 μL NADH 标准品和/或测试样品
- 加入 25 μL NAD 提取溶液
- 37岁孵化oC 15 分钟
- 加入 25 μL 中和溶液
- 加入 75 μL NAD/NADH 工作溶液
- 在室温下孵育 15 分钟至 2 小时
- 监测 460 nm 处的吸光度
强烈建议在37°C下用裂解缓冲液（组分G）孵育细胞，并使用上清液进行实验。
在开始实验之前，在室温下解冻每种试剂盒组分之一。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环
NADH 标准溶液 （1 mM）
将 200 μL 1X PBS 缓冲液加入 NADH 标准品（组分 C）小瓶中，制成 1 mM （1 nmol/μL） NADH 标准溶液。
标准溶液的制备
NADH标准
将 50 μL 1 mM （1 nmol/μL） NADH 标准溶液加入 450 μL 1X PBS 缓冲液 （pH 7.4） 中，生成 100 μM （100 pmols/μL） NADH 标准溶液。然后取100μM NADH标准溶液，在1X PBS缓冲液中进行2：1连续稀释，以获得连续稀释的NADH标准品（NS1 - NS7）。注意：稀释的NADH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
工作溶液的制备
将 8 mL NADH 探针缓冲液（组分 B-II）加入 NAD/NADH 回收酶混合物（组分 A）瓶中，并充分混合。
将 2 mL NADH 探针（组分 B-I）加入组件 A+B-II 的瓶中，充分混合制成 NAD/NADH 工作溶液。
注意 这种NAD / NADH工作溶液足以进行125-200次测定。工作溶液不稳定，及时使用，避免直接暴露在光线下。
注意 可以尝试使用ddH 2 O（例如500 uL）溶解组分A，然后按比例与B-II和B-I混合，以使NAD / NADH工作溶液仅供充分使用。