产品说明：
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是细胞中发现的两种重要的辅助因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代谢生物反应，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作为还原剂。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定是通过监测340nm处的NADH或NADPH吸收来完成的。该方法灵敏度低，干扰高，因为测定是在需要昂贵的石英微孔板的紫外范围内进行的。我们的 Amplite® NADP/NADPH 比率检测试剂盒为灵敏检测 NADP、NADPH 及其比率提供了一种方便的方法。NADPH探针是一种显色传感器，在NADH还原时在~460nm处具有最大吸光度。~460nm处的吸光度增加与溶液中NADPH的浓度成正比。NADPH探针可以在无酶反应中识别NADPH，并且吸光度酶标仪可以在~460nm处轻松读取信号。Amplite® 比色法 NADPH 检测试剂盒提供灵敏的检测方法，可在 3 μL 检测体积中检测低至 100 μM NADPH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行。
平台
吸光度酶标仪
吸光度 460 纳米
推荐板 清除底部
组件
组分A：NADP / NADPH回收酶混合物 2瓶（冻干粉）
组件 B-I：NADPH 探头 1 瓶 （4 mL）
组分 B-II：NADPH 探针缓冲液 1 瓶 （16 mL）
组件C：NADPH标准 1 瓶 （167 μg）
组分D：NADP提取液 1 瓶 （10 mL）
组分E：中和溶液 1 瓶 （10 mL）
组件F：提取控制解决方案 1 瓶 （10 mL）
组分G：裂解缓冲液 1 瓶 （10 mL）
示例协议
一目了然
协议摘要
重要说明
强烈建议在37°C下用裂解缓冲液（组分G）孵育细胞，并使用上清液进行实验。
在开始实验之前，在室温下解冻每种试剂盒组分之一。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环
NADPH 标准溶液 （1 mM）
将 200 μL PBS 缓冲液加入 NADPH 标准品（组分 C）的小瓶中，以获得 1 mM （1 nmol/μL） NADPH 储备溶液。
标准溶液的制备
NADPH 标准
将 10 μL 1 mM NADPH 储备溶液加入 490 μL PBS 缓冲液 （pH 7.4） 中，生成 20 μM （20 pmols/μL） NADPH 标准溶液。然后取20μM NADPH标准溶液并进行1：2系列稀释，以获得剩余的连续稀释NADPH标准品（NS7 - NS1）。注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
工作溶液的制备
注意此NADP / NADPH工作溶液足以进行125-200次测定。工作溶液不稳定，及时使用，避免直接暴露在光线下。
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是细胞中发现的两种重要的辅助因子。NADH是NAD +的还原形式，NAD +是NADH的氧化形式。它通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的 2' 位置以形成 NADP。NADP用于合成代谢生物反应，如脂肪酸和核酸合成，需要NADPH作为还原剂。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定是通过监测340nm处的NADH或NADPH吸收来完成的。该方法灵敏度低，干扰高，因为测定是在需要昂贵的石英微孔板的紫外范围内进行的。我们的 Amplite® NADP/NADPH 比率检测试剂盒为灵敏检测 NADP、NADPH 及其比率提供了一种方便的方法。NADPH探针是一种显色传感器，在NADH还原时在~460nm处具有最大吸光度。~460nm处的吸光度增加与溶液中NADPH的浓度成正比。NADPH探针可以在无酶反应中识别NADPH，并且吸光度酶标仪可以在~460nm处轻松读取信号。Amplite® 比色法 NADPH 检测试剂盒提供灵敏的检测方法，可在 3 μL 检测体积中检测低至 100 μM NADPH。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行。
平台
吸光度酶标仪
吸光度 460 纳米
推荐板 清除底部
组件
组分A：NADP / NADPH回收酶混合物 2瓶（冻干粉）
组件 B-I：NADPH 探头 1 瓶 （4 mL）
组分 B-II：NADPH 探针缓冲液 1 瓶 （16 mL）
组件C：NADPH标准 1 瓶 （167 μg）
组分D：NADP提取液 1 瓶 （10 mL）
组分E：中和溶液 1 瓶 （10 mL）
组件F：提取控制解决方案 1 瓶 （10 mL）
组分G：裂解缓冲液 1 瓶 （10 mL）
示例协议
一目了然
协议摘要
- 准备 25 μL NADPH 标准品和/或测试样品
- 加入 25 μL NADP 提取溶液
- 在37°C孵育15分钟
- 加入 25 μL 中和溶液
- 加入 75 μL NADP/NADPH 工作溶液
- 在室温下孵育 15 分钟至 2 小时
- 监测 460 nm 处的吸光度
重要说明
强烈建议在37°C下用裂解缓冲液（组分G）孵育细胞，并使用上清液进行实验。
在开始实验之前，在室温下解冻每种试剂盒组分之一。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环
NADPH 标准溶液 （1 mM）
将 200 μL PBS 缓冲液加入 NADPH 标准品（组分 C）的小瓶中，以获得 1 mM （1 nmol/μL） NADPH 储备溶液。
标准溶液的制备
NADPH 标准
将 10 μL 1 mM NADPH 储备溶液加入 490 μL PBS 缓冲液 （pH 7.4） 中，生成 20 μM （20 pmols/μL） NADPH 标准溶液。然后取20μM NADPH标准溶液并进行1：2系列稀释，以获得剩余的连续稀释NADPH标准品（NS7 - NS1）。注意：稀释的NADPH标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
工作溶液的制备
- 将 8 mL NADPH 探针缓冲液（组分 B-II）加入 NADP/NADPH 回收酶混合物（组分 A）瓶中，并充分混合。
- 将 2 mL NADPH 探针（组分 B-I）加入同一瓶中（来自步骤 1）并充分混合。
注意此NADP / NADPH工作溶液足以进行125-200次测定。工作溶液不稳定，及时使用，避免直接暴露在光线下。