产品说明：
细胞内二氢烟xian胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现具有重要意义。一般来说，氧化还原偶联NAD/NADH和NADP/NADPH在能量代谢、糖酵解、三羧酸循环和线粒体呼吸中起着关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与活性氧（ROS）的异常产生和DNA损伤有关。然而，由于缺乏灵敏的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H一直具有挑战性。细胞计™细胞内NADH/NADPH流式细胞术分析试剂盒提供了一种监测活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法。JZL1707 NAD（P）H传感器已被开发为一种出色的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。探针结合NADH / NADPH以产生具有高灵敏度和特异性的强荧光信号。JZL1707 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用PE通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。
平台
流式细胞仪
Excitation：488 nm 激光
Emission：575/26 nm 滤光片
仪器规格：聚**通道
组件
组件A： JZL1707 NAD（P）H 传感器    1 瓶 （100 uL）
组分B：检测缓冲液    1 瓶 （50 mL）

1. 准备细胞 （0.5 - 1×106细胞/毫升）
2. 用测试化合物和JZL1707 NAD（P）H传感器在37ºC下孵育细胞30-60分钟
3. 洗涤并将细胞保存在检测缓冲液中
4. 使用PE通道使用流式细胞仪分析细胞

重要事项：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。
实验方案样本

1. 对于每个样品，在您选择的 0.5 mL 无血清培养基或缓冲液中制备细胞，密度为 1×10⁵至 1×10⁶细胞/毫升。注意：应单独评估每个细胞系，以确定最佳细胞密度。对于贴壁细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。注意：JZL1707 NAD（P）H传感器对血清敏感，因此建议将细胞保存在您选择的无血清培养基或缓冲液中。或者，可以在常规全培养基中制备和处理细胞。使用JZL1707 NAD（P）H传感器孵育时，更换为您选择的无血清培养基或缓冲液。
2. 将细胞与测试化合物在 37 ºC 下孵育所需的时间，以刺激细胞内 NADH/NADPH。注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。
3. 将 1 μL JZL1707 NAD（P）H 传感器（组分 A）加入 0.5 mL 细胞悬液中。在 37 ºC 下孵育 30-60 分钟。注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将Jurkat细胞与100μM NADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JZL1707 NAD（P）H传感器工作溶液在37ºC下再孵育30分钟。
4. 用所需的缓冲液洗涤细胞一次。将细胞保存在检测缓冲液（组分B）中。
5. 使用流式细胞仪监测PE通道处的荧光强度。对感兴趣的细胞进行门控，不包括碎片。