产品说明：
细胞内二氢烟xian胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和药物发现具有重要意义。一般来说，氧化还原偶联NAD/NADH和NADP/NADPH在能量代谢、糖酵解、三羧酸循环和线粒体呼吸中起着关键作用。细胞中NAD（P）H水平的增加与活性氧（ROS）的异常产生和DNA损伤有关。然而，由于缺乏灵敏的NAD（P）H探针，在生物系统中检测细胞内NAD（P）H一直具有挑战性。细胞计™细胞内NADH/NADPH流式细胞术分析试剂盒提供了一种有效的方法来监测远谱活细胞中的细胞内NAD（P）H水平，并且可以与其他应用（如GFP表达的细胞或MitoTracker的应用）结合使用。JJ1902 NAD（P）H传感器已被开发为一种出色的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该探针本质上是荧光探针，结合NADH / NADPH以产生具有高灵敏度和特异性的强荧光信号。JJ1902 NAD（P）H传感器可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用APC通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。
平台
流式细胞仪
Excitation：640 nm 激光
Emission：660/20 nm 滤光片
仪器规格：APC 渠道
组件
组件A： JJ1902 钠（P）H传感器      1 瓶 （100 μL）
组分B：检测缓冲液    1 瓶 （50 mL）

1. 准备细胞 （0.5 - 1×106细胞/毫升）
2. 用测试化合物和JJ1902 NAD（P）H传感器在37时孵育细胞oC 20-30 分钟
3. 洗涤并将细胞保存在检测缓冲液中
4. 使用APC通道使用流式细胞仪分析细胞

重要事项：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。
实验方案样本

1. 对于每个样品，在您选择的 0.5 mL 无血清培养基或缓冲液中制备细胞，密度为 1×105至 1×106细胞/毫升。注意：应单独评估每个细胞系，以确定最佳细胞密度。对于贴壁细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。注意：JJ1902 NAD（P）H传感器在血清存在下也兼容。传感器条件的优化是强烈建议细胞系到细胞系。                                                                                                                                                                             
2. 将细胞与测试化合物一起孵育在37oC在所需的时间内刺激细胞内NADH / NADPH。注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。
3. 将 1 μL JJ1902 NAD（P）H 传感器（组分 A）加入 0.5 mL 细胞悬液中。37岁孵化oC 30-60 分钟。注意：对于NADH / NADPH阳性对照治疗：将Jurkat细胞与100μM NADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H传感器工作溶液在37oC 再持续 30 分钟。
4. 用所需的缓冲液（如HHBS或DPBS）洗涤细胞一次。将细胞保存在检测缓冲液（组分B）中。

使用流式细胞仪监测APC通道处的荧光强度。对感兴趣的细胞进行门控，不包括碎片。