产品说明：

激发（纳米） 576

发射（纳米） 598

 
细胞内羟基自由基的检测对于了解适当的细胞氧化还原调节及其失调对各种病理的影响至关重要。羟基自由基（'OH）是与其他分子高度反应以实现稳定性的活性氧（ROS）之一。一般来说，羟基自由基被认为是氧化代谢的有害副产物，可对生命系统造成分子损伤。它的平均寿命为10-9纳秒，几乎可以与所有生物分子反应，如核DNA，线粒体DNA，蛋白质和膜脂质。亚洲空运中心Bioquest的细胞计™线粒体羟基自由基检测试剂盒经过优化，可检测线粒体中的羟基自由基。MitoROS™ OH580是活细胞通透探针，可以快速、选择性地靶向活细胞中的羟基自由基。当它与'OH反应时，它会产生红色荧光，并且很容易读取。细胞计™线粒体羟基自由基检测试剂盒提供了一种灵敏的荧光探针，可在孵育一小时后检测活细胞中的OH'。该试剂盒可用于荧光酶标仪和荧光显微镜应用。
 
组件
 
组分 A：米托罗斯™ OH580    1瓶
组分B：检测缓冲液     1 瓶 （50 mL）
组件C：DMSO     1 瓶 （100 μL）
 
示例协议
 
一目了然
协议摘要
 

1. 准备细胞
2. 用MitoROS™ OH580工作溶液在37°C孵育细胞60分钟
3. 用测试化合物孵育细胞（以诱导OH-)
4. 监测Ex/Em= 540/590 nm处的荧光增加

 
重要注意事项
使用前在室温下解冻所有组件。
 
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. MitoROS OH580储备溶液（500X）：
将50 μL DMSO（组分C）加入MitoROS™ OH580（组分A）的小瓶中，并充分混合。™注意：25 uL 储备溶液足以用于 1 个板。注意：如果未使用的部分可以等分并在≤-20ºC下储存超过一个月，如果管子密封严密并保持避光。避免反复冻融循环。
 
工作溶液的制备
将 25 μL 500X DMSO 重构的 MitoROS™ OH580 储备溶液加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中。混合均匀。注意：该工作溶液在室温下可稳定至少2小时。
 
实验方案样本

1. 取出培养基，向细胞板中加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 MitoROS™ OH580 工作溶液。将细胞在 37°C 下孵育 60 分钟。
2. 为了诱导羟基自由基，请在 37°C 下用所需缓冲液（例如 PBS 或 HHBS）中的测试化合物处理细胞一段时间，避光。注意：我们用芬顿反应（10μM CuCl2和 100 μM H2O2） 在 37°C 下 1 小时以诱导外源性羟基自由基。有关详细信息，请参见图 1。我们在264°C的生长培养基中用PMA（佛波醇7-肉豆蔻酸12-乙酸酯）处理RAW 13.37细胞4小时，以刺激内源性羟基自由基。
3. 用 HHBS 或 DPBS 洗涤细胞 2 - 3 次，并向每个孔中加入 100 μL 测定缓冲液（组分 B）。
4. 使用带有TRITC滤光片组的荧光显微镜监测细胞中的荧光信号，或使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590 nm（截止= 570 nm）下测量荧光增加，底部读取模式。