产品说明：
       过氧亚硝酸盐（ONOO-）是一种强氧化性物质和高活性硝化剂。过氧亚硝酸盐是由细胞中产生的超氧自由基和一氧化氮之间的反应形成的。它可以对多种生物分子造成损害，包括蛋白质、酶、脂质和核酸，最终导致细胞死亡。同时，过氧亚硝酸盐还可以通过促进宿主对入侵病原体的防御反应而在体内具有保护活性。因此，过氧亚硝酸盐是一种必需的生物氧化剂，参与一系列生理和病理过程。由于其极短的半衰期和低稳态浓度，检测和理解过氧亚硝酸盐在生物系统中的作用一直具有挑战性。亚洲空运中心生物探索的DAX-J2™ PON Green就是为了解决这一未满足的需求而开发的。它提供了一种灵敏的工具来监测活细胞中的ONOO-水平。亚洲空运中心生物探索的DAX-J2™ PON Green与细胞间ONOO-发生特异性反应，产生亮绿色荧光产品。它可用于荧光成像、流式细胞术和基于荧光酶标仪的测定。
 
平台
荧光显微镜
Excitation  490 纳米
Emission    530 纳米
推荐板  黑色墙壁/透明底部
仪器规格    FITC过滤器套件
荧光酶标仪
Excitation  490 纳米
Emission    530 纳米
Cutoff 515 纳米
推荐板  黑色墙壁/透明底部
仪器规格    底部读取模式
 
组件
组件 A：DAX-J2™ PON 绿色 1瓶
组分B：检测缓冲液     1 瓶（1 毫升/瓶）
组件C：DMSO     1 瓶（100 μL/瓶）
 
示例协议
 
一目了然
协议摘要
 

1. 在生长培养基中制备细胞
2. 将细胞与测试化合物和 DAX-J2™ PON Green 工作溶液共孵育 37oC 表示所需时间段
3. 在Ex/Em = 490/530 nm（截止= 515 nm）下监测荧光强度

 
重要说明
在开始实验之前，将所有试剂盒组件置于室温下。
 
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
 
1. DAX-J2 PON Green 储备溶液 （500X）：
将 20 μL DMSO（组分 C）加入 DAX-J2™™ PON Green （组分 A）小瓶中，混合均匀。注意：20 μL 重构 DAX-J2™ PON Green 储备溶液足以制作 1 个板。
 
工作溶液的制备
将 10 μL 500X DMSO 重构的 DAX-J2™ 过氧亚硝酸盐传感器储备溶液加入 500 μL 检测缓冲液（组分 B）中并充分混合。注意：工作溶液不稳定;使用前根据需要准备。
 
实验方案样本

1. 在细胞板中每孔加入 10 μL/孔（96 孔板）或 2.5 μL/孔（384 孔板）DAX-J2™ PON Green 工作溶液中。注意：染色前无需清洗细胞。建议在全培养基中对细胞进行染色。
2. 将细胞与 DAX-J2™ PON Green 与测试化合物在全培养基或所需的缓冲液中在 37°C 下共同孵育所需的时间，避光。对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的复合缓冲液。注意：建议在全培养基中对细胞进行染色。但是，如果测试化合物对血清敏感，则可以在染色前吸走生长培养基和血清因子。抽吸后加入 90 μL/孔（96 孔板）和 22.5 μL/孔（384 孔板）的 1X Hank 盐溶液和 20 mM Hepes 缓冲液 （HHBS） 或您选择的缓冲液。或者，可以在无血清培养基中对细胞进行染色。我们将 RAW 264.7 巨噬细胞与 50 - 200 μM SIN-1 和 DAX-J2™ PON Green 在 37°C 的全培养基中共孵育 1 小时以诱导过氧亚硝酸盐。有关详细信息，请参见图 1。
3. 或者，用 DAX-J2™ PON Green 在 37°C 下对细胞进行染色 1 小时，避光。取出工作溶液，然后在全培养基或所需的缓冲液中用测试化合物在37°C下处理细胞所需的时间。
4. 使用酶标仪在Ex / Em = 490 / 530 nm（截止= 515nm）下以底部读取模式监测荧光增加，或使用带有FITC滤光片的荧光显微镜拍摄图像。