产品说明：
过氧亚硝酸盐（ONOO-）是一种强氧化性物质和高活性硝化剂。过氧亚硝酸盐是由细胞中产生的超氧自由基和一氧化氮之间的反应形成的。它可以破坏多种生物分子，包括蛋白质、酶、脂质和核酸，最终导致细胞死亡。同时，过氧亚硝酸盐还可以通过促进宿主对入侵病原体的防御反应而在体内具有保护活性。因此，过氧亚硝酸盐是一种必需的生物氧化剂，涉及广泛的生理和病理过程。由于其极短的半衰期和低稳态浓度，检测和理解过氧亚硝酸盐在生物系统中的作用一直具有挑战性。为了解决这一未满足的需求，亚洲空运中心Bioquest的细胞计™荧光细胞内过氧亚硝酸盐（ONOO-）检测试剂盒提供了一种灵敏的工具，用于监测活细胞中的ONOO-水平。亚洲空运中心生物探索的DAX-J2™ PON Green是一款出色的荧光探针，可与细胞间ONOO'特异性反应，产生亮绿色荧光产物。该试剂盒针对流式细胞术进行了优化。
平台
流式细胞仪
Excitation：488 nm 激光
Emission：530/30 nm 滤光片
仪器规格：FITC频道
组件
组件 A：DAX-J2™ PON 绿色      2瓶
组件B：DMSO—1 瓶（100 μL/瓶）

1. 在生长培养基中制备细胞
2. 将细胞与测试化合物（刺激 ONOO ̄）和 DAX-J2™ PON 绿色工作溶液共孵育
3. 监测Ex/Em = 490/530 nm下的荧光强度

重要提示：在开始方案之前，让所有组件加热到室温。
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
DAX-J2™ PON 绿色储备液 （400X）
将 25 μL DMSO（组分 C）加入 DAX-J2™ PON 绿（组分 A）小瓶中，并充分混合。注意：1 μL 重构的 DAX-J2™ PON Green 储备溶液足以容纳 0.4 mL 细胞。
实验方案样本

1. 将细胞与 DAX-J2™ PON Green 与测试化合物在全培养基或所需的缓冲液中在 37°C 下共同孵育所需的时间，避光。对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的复合缓冲液。注意：建议在全培养基中对细胞进行染色。但是，如果测试化合物对血清敏感，则可以在染色前吸走生长培养基和血清因子。抽吸后将细胞重悬于1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液中。或者，可以在无血清培养基中对细胞进行染色。我们将 Jurkat 细胞与 200 μM SIN-1 和 DAX-J2™ PON Green 在 37°C 的全培养基中共孵育 1 小时以诱导过氧亚硝酸盐。有关详细信息，请参见图 1（A）。
2. 或者，用 DAX-J2™ PON Green 在 37°C 下对细胞进行染色 1 小时，避光。取出工作溶液，然后在全培养基或所需的缓冲液中用测试化合物在37°C下处理细胞所需的时间。详见图1（B）。
3. 使用流式细胞仪监测FITC通道（Ex / Em = 490 / 530 nm）的荧光强度。对感兴趣的细胞进行门控，不包括碎片。