产品说明：

分子量 不适用

激发（纳米） 509

发射（纳米） 529

 
检测和定量少量 RNA 对于各种分子生物学程序非常重要，例如在进行 Northern 印迹分析、S1 核酸酶测定、RNase 保护测定、cDNA 文库制备、逆转录 PCR 和差异显示 PCR 之前测量体外转录 RNA 的产量和测量 RNA 浓度。测量核酸浓度最常用的技术是测定260nm处的吸光度。基于吸光度的方法的主要缺点是由蛋白质、游离核苷酸和其他紫外线吸收化合物引起的干扰。使用灵敏的荧光核酸染色剂可以缓解这种干扰问题。StrandBrite™ RNA定量试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂，用于定量溶液中的RNA。它是一种带正电荷的荧光探针，与RNA的疏水口袋结合，并通过堆叠，疏水力，氢键和静电相互作用的协同作用形成高发光复合物。StrandBrite™ RNA定量试剂具有极低的固有荧光，在与RNA结合时会显着增强，从而大大增强其荧光。StrandBrite™ RNA定量试剂可以使用荧光酶标仪或荧光计检测低至5ng/mL RNA。
 
平台
荧光酶标仪
Excitation  490 纳米
Emissio      525 纳米
Cutoff     515 纳米
推荐板  纯黑色
 
 
示例协议
 
标准溶液的制备
核糖核酸标准品
在DEPC处理过的水中制备100 ug/mL的RNA储备溶液。从该储备液中制备 2 ug/mL 的 TE 缓冲液，并进行 1：2 稀释以获得 1000、500、250、125、62.5、31.3、15.6 和 0 ng/mL（空白）。
 
工作溶液的制备
斯特兰璋绿色™工作解决方案
通过在TE中对浓缩的DMSO溶液进行200倍稀释（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，在DEPC处理过的水中pH 7.5）来制备StrandBrite™ Green的水性工作溶液。例如，将 50 μL StrandBrite™ Green 添加到 10 mL TE 缓冲液中，以制备足够的工作溶液，以 100 μL 的最终体积测定 200 个样品。用箔纸覆盖或将其放在黑暗中，保护工作溶液免受光照。
 
注意 我们建议将此溶液制备在塑料容器而不是玻璃中，因为染料可能会吸附到玻璃表面。
 
注意 为获得最佳效果，应在制备后的几个小时内使用此解决方案。
 
实验方案样本
以下协议是使用StrandBrite Green定量RNA的示例。 在打开小瓶之前，让StrandBrite™™ Green加热至室温。
 
注意 在处理所有材料时，请始终使用干净的一次性手套，以防止RNase污染。
 
注意 没有关于链辉™绿RNA染色的致突变性或毒性的数据。由于该试剂与核酸结合，因此应将其视为潜在的诱变剂，并应谨慎处理。
 
表 1.在纯黑色 96 孔微孔板中排列 RNA 标准品和测试样品。（RS = RNA标准品;BL = 空白控件;TS = 测试样品）

提单	提单	TS	TS
RS1	RS1	...	...
RS2	RS2
RS3	RS3
RS4	RS4
RS5	RS5
RS6	RS6
RS7	RS7

 
表 2.每个孔的试剂组成（将15.6至1000 ng/mL的连续稀释RNA标准品一式两份添加到RS1至RS7的孔中）

核糖核酸标准品	空白控件	测试样品
连续稀释液 （100 μL）	TE： 100 μL	100 微升

 
运行核糖核酸检测

1. 向RNA标准品、空白对照和测试样品的每个孔中加入100 μL链辉™绿工作溶液，使总RNA测定体积为200 μL/孔。

注意 对于 384 孔板，每孔加入 25 μL 样品和 25 μL StrandBrite™ Green 工作溶液。

2. 将反应在室温下孵育5至10分钟，避光。
3. 用分光荧光计在Ex / Em = 490/525nm处监测荧光增加（截止值为515nm）。

注意 为了尽量减少光漂白效应，请保持所有样品的荧光测量时间恒定。

4. 空白孔中的荧光（仅使用测定缓冲液）用作对照，并从具有RNA标准品或测试样品的比色皿的值中减去。样品的RNA浓度根据RNA标准曲线确定。