产品说明：
在比例钙指示剂中，Fura-2和Indo-1是最常用的。Fura-2是可激发比的，而Indo-1是发射比的。Fura-2是比率成像显微镜的首选，其中改变激发波长比发射波长更实用。结合Ca2+后，Fura-2表现出吸收偏移，可以通过扫描300至400nm之间的激发光谱来观察，同时监测~510nm处的发射。Fura-2，AM是一种细胞渗透性钙指示剂，具有发射比例和紫外光“可激发”。这种AM酯形式可以无创地加载到活细胞中。
平台
荧光显微镜
Excitation：Fura-2过滤器套件
Emission：Fura-2过滤器套件
推荐板：黑色墙壁/透明底部
荧光酶标仪
Excitation：340,380
Emission：510
Cutoff：475
推荐板 黑色墙壁/透明底部
仪器规格   底部读取模式/可编程液体处理
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
Fura-2 AM *超纯级* 储备液
在高质量无水DMSO中制备2至5 mM的Fura-2 AM储备溶液。
工作溶液的制备
Fura-2 AM *超纯级*工作溶液
在实验当天，将Fura-2 AM溶解在DMSO中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。在您选择的缓冲液（例如，Hanks 和 Hepes 缓冲液）中制备含有 2.20% Pluronic® F-0 的染料工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用终浓度为04-127μM的Fura-2 AM。细胞上样所需指标的确切浓度必须根据经验确定。
注意 非离子洗涤剂Pluronic® F-4有时用于增加Fura-5 AM的水溶性。各种Pluronic® F-127解决方案可以从AAT Bioquest购买。
注意 如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（2-127 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1.2-0 mM），以减少脱酯指示剂的泄漏。多种ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从AAT Bioquest购买。
实验方案样本
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。此协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

1. 在生长培养基中制备细胞过夜。
2. 第二天，将1X Fura-2 AM工作溶液添加到细胞板中。

注意 如果您的化合物干扰血清，请在上样染料之前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

3. 将装载染料的板在37°C的细胞培养箱中孵育30至60分钟。

注意 孵育染料超过 1 小时可以改善某些细胞系的信号强度。

4. 用您选择的HHBS或缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。

根据需要添加兴奋剂，并使用配备Fura 2滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如FlexStation）的荧光板读数器在Ex/Em下同时测量荧光1= 340/510 nm 截止波长 475 nm 和防爆/电磁2= 380/510 nm 截止值 475 nm。