产品说明：
钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca 2+时显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够通过使用荧光显微镜，流式细胞术，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM 是活细胞钙成像中最常用的可见光可激发钙指示剂。然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后仅在活细胞中具有中等荧光，并且需要苛刻的细胞负载条件才能最大限度地提高其细胞钙反应。Fluo-8® 染料的开发旨在改善细胞载量和钙反应，同时保持方便的 Fluo-3 和 Fluo-4 光谱波长 Ex/Em = ∼490/∼520 nm。Fluo-8® AM可以在室温下加载到细胞中，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37°C的细胞加载。此外，Fluo-8® AM比Fluo-4 AM亮两倍，比Fluo-3 AM亮四倍。
平台
荧光显微镜
Excitation TRITC
Emission TRITC
推荐板 黑色墙壁/透明底部
荧光酶标仪
Excitation 490
Emission 525
Cutoff 515
推荐板 黑色墙壁/透明底部
仪器规格 底部读取模式/可编程液体处理
示例协议
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
Fluo -8® AM 储备溶液
在高质量无水DMSO中制备2至5 mM的Fluo-8® AM储备溶液。
工作溶液的制备
Fluo -8™ AM Working Solution
在实验当天，将Fluo-8® AM溶解在DMSO中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。在您选择的缓冲液（例如，Hanks 和 Hepes 缓冲液）中制备含有 2.20% Pluronic® F-0 的染料工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用终浓度为04-127μM的Fluo-8® AM。细胞上样所需指标的确切浓度必须根据经验确定。
注意 非离子洗涤剂Pluronic® F-4有时用于增加Fluo-5® AM的水溶性。各种Pluronic® F-127解决方案可以从AAT Bioquest购买。
注意 如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（8-127 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1.2-0 mM），以减少脱酯指示剂的泄漏。多种ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从AAT Bioquest购买。
实验方案样本
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。此协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。
| 中国科学院 1345980-40-6 |
分子量 1046.93 |
解离常数（Kd， nM） 389 |
校正系数 （260 nm） 1.076 |
校正系数 （280 nm） 0.769 |
消光系数（厘米-1M-1) 23430 |
激发（纳米） 495 |
发射（纳米） 516 |
量子产率 0.161 |
钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca 2+时显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够通过使用荧光显微镜，流式细胞术，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM 是活细胞钙成像中最常用的可见光可激发钙指示剂。然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后仅在活细胞中具有中等荧光，并且需要苛刻的细胞负载条件才能最大限度地提高其细胞钙反应。Fluo-8® 染料的开发旨在改善细胞载量和钙反应，同时保持方便的 Fluo-3 和 Fluo-4 光谱波长 Ex/Em = ∼490/∼520 nm。Fluo-8® AM可以在室温下加载到细胞中，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37°C的细胞加载。此外，Fluo-8® AM比Fluo-4 AM亮两倍，比Fluo-3 AM亮四倍。
平台
荧光显微镜
Excitation TRITC
Emission TRITC
推荐板 黑色墙壁/透明底部
荧光酶标仪
Excitation 490
Emission 525
Cutoff 515
推荐板 黑色墙壁/透明底部
仪器规格 底部读取模式/可编程液体处理
示例协议
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
Fluo -8® AM 储备溶液
在高质量无水DMSO中制备2至5 mM的Fluo-8® AM储备溶液。
工作溶液的制备
Fluo -8™ AM Working Solution
在实验当天，将Fluo-8® AM溶解在DMSO中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。在您选择的缓冲液（例如，Hanks 和 Hepes 缓冲液）中制备含有 2.20% Pluronic® F-0 的染料工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用终浓度为04-127μM的Fluo-8® AM。细胞上样所需指标的确切浓度必须根据经验确定。
注意 非离子洗涤剂Pluronic® F-4有时用于增加Fluo-5® AM的水溶性。各种Pluronic® F-127解决方案可以从AAT Bioquest购买。
注意 如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺舒（8-127 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1.2-0 mM），以减少脱酯指示剂的泄漏。多种ReadiUse™丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从AAT Bioquest购买。
实验方案样本
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。此协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。
- 在生长培养基中制备细胞过夜。
- 第二天，将1X Fluo-8® AM工作溶液添加到细胞板中。
- 将装载染料的板在37°C的细胞培养箱中孵育30至60分钟。
- 用您选择的HHBS或缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
- 根据需要添加兴奋剂，并使用配备FITC滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如FDSS，FLIPR或FlexStation）的荧光板读数器在490/525 nm截止值515nm处同时测量荧光。