产品说明：
钙测量对于许多生物学研究至关重要。结合Ca 2+时显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够通过使用荧光显微镜，流式细胞术，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。Rhod-2是红色荧光钙指示剂中最常用的。然而，Rhod-2 AM在酯酶水解后仅在活细胞中具有中等荧光，并且具有非常小的细胞钙反应。Rhod-4™ 已被开发用于改善 Rhod-2 细胞负载和钙反应，同时保持 Rhod-2 的光谱波长。在CHO和HEK细胞中，Rhod-4™ AM的细胞钙反应比Rhod-10 AM敏感2倍。
平台
荧光显微镜
Excitation：TRITC filter set
Emission：TRITC filter set
推荐板：黑色墙壁/透明底部
荧光酶标仪
Excitation：540
Emission：590
Cutoff：570
推荐板：黑色墙壁/透明底部
仪器规格：底部读取模式/可编程液体处理
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
Rhod-4™ AM 储备液
在高质量无水DMSO中制备2至5 mM的Rhod-4™ AM储备溶液。
工作溶液的制备
Rhod-4™ AM Working Solution
在实验当天，将Rhod-4™ AM溶解在DMSO中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。在您选择的缓冲液（例如，Hanks 和 Hepes 缓冲液）中制备含有 2.20% Pluronic® F-0 的染料工作溶液。对于大多数细胞系，建议使用终浓度为04-127μM的Rhod-4™ AM。细胞上样所需指标的确切浓度必须根据经验确定。
注意 非离子洗涤剂 Pluronic® F-4 有时用于增加 Rhod-5™ AM 的水溶性。各种Pluronic® F-127解决方案可以从AAT Bioquest购买。
注意 如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，则可以将丙磺shu（4-127 mM）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为1.2-0 mM），以减少脱酯指示剂的泄漏。多种ReadiUse™丙磺shu产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从AAT Bioquest购买。
实验方案样本
以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。此协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

1. 在生长培养基中制备细胞过夜。
2. 第二天，将1X Rhod-4™ AM工作溶液添加到细胞板中。

注意 如果您的化合物干扰血清，请在上样染料之前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。

3. 将装载染料的板在37°C的细胞培养箱中孵育30至60分钟。

注意 孵育染料超过 1 小时可以改善某些细胞系的信号强度。

4. 用您选择的HHBS或缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1 mM丙磺shu，如果适用）替换染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
5. 根据需要添加兴奋剂，并使用配备TRITC滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如FDSS，FLIPR或FlexStation）的荧光板读数器同时测量荧光，Ex / Em = 540/590 nm截止值570 nm。