产品说明：
吞噬作用被定义为细胞对等离子膜包膜内的颗粒的细胞吸收。吞噬过程在吞噬和破坏入侵微生物的先天免疫反应中至关重要。吞噬作用也需要通过清除凋亡体来维持组织稳态和重塑。吞噬作用的摄取机制取决于颗粒的大小、受体-配体相互作用和细胞骨架的受累。一旦内化，吞噬体与溶酶体融合形成次级吞噬溶酶体进行消化，导致pH值逐渐降低。我们的细胞计™荧光吞噬检测试剂盒采用独特的 pH 依赖性 Protonex™ 600 红乳胶珠偶联物。珠子处于即用型悬浮液中。与大多数现有的荧光染料不同，Protonex™ 600 Red-乳胶珠偶联物在细胞外是无荧光的。然而，当它们位于酸性吞噬体/吞噬溶酶体内时，其荧光显着增加。这一特性使其易于使用，无需台盼蓝淬灭步骤，是研究吞噬作用及其法规的可靠工具。细胞计™荧光吞噬测定试剂盒还包括一种绿色荧光细胞活力染料，可通过荧光显微镜同时检测活细胞和吞噬过程。该测定法也适用于荧光酶标仪和流式细胞术检测。
平台
荧光显微镜
推荐板：黑色墙壁/透明底部
仪器规格：德州红/FITC过滤器
组件
组分 A：质子 600 红乳胶珠偶联物—1 瓶 （15 μL）
组分B：细胞痕量™绿—1瓶
组件C：DMSO—1 瓶 （100 μL）

1. 平板细胞
2. 添加 12.5 μL Protonex™ 600 红乳胶珠偶联物
3. 在37°C孵育4小时
4. 添加 12.5 μL 细胞痕量™绿色
5. 在37°C孵育30分钟
6. 使用德州红和FITC滤光片通过显微镜监测荧光

重要事项：在开始实验之前将所有试剂盒组分解冻至室温。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. 质子™ 600红乳胶珠偶联液（12X）
在 8 mL 细胞生长培养基（含 600% FBS）中加入 2 μL Protonex 10 RedLatex™ 微球偶联物（组分 A）。
注意未使用的珠子可以储存在4°C。
2. 细胞痕量™绿色储备液 （400X）
将 20 μL DMSO（组分 C）加入小瓶中的 CytoTrace™ Green（组分 B）中，并充分混合。
注意 未使用的CytoTrace™绿色DMSO储备溶液可以等分到一次性小瓶中并储存在-20°C。
工作溶液的制备
细胞痕量™绿色工作溶液（12X）
在 5 mL 细胞生长培养基中加入 400 μL CytoTrace™ Green 储备溶液 （2X），并充分混合。
实验方案样本

1. 向每个孔中加入 25 μL 6X 细胞松弛素 D 作为阳性对照或测试化合物。

注意测定中使用的细胞松弛素D的浓度应针对每个单独的细胞系进行优化。

2. 将板在细胞培养箱中孵育30分钟。
3. 向每个孔中加入 12.5 μL Protonex™ 600 红乳胶珠偶联液 （12X）。
4. 将板在细胞培养箱中孵育4小时。

注意 用户应针对每个单独的细胞系优化孵育时间。

5. 向每个孔中加入 12.5 μL CytoTrace™ Green 工作溶液 （12X）。
6. 将板在细胞培养箱中孵育30分钟。
7. 用1X PBS清洗盘子两次。
8. 用德克萨斯红滤光片（Ex / Em = 570 / 600 nm）和CytoTrace™ Green用FITC滤光片（Ex / Em = 490 / 525 nm）观察细胞内的吞噬作用。