产品说明：

分子量 ~500

激发（纳米） 492

发射（纳米） 514

 
流式细胞术结合荧光染色是分析异质细胞群的有力工具。在所有现有的荧光染料中，CFSE是广泛用于活细胞分析的首选细胞增殖指示剂。然而，使用CFSE监测细胞增殖存在一些严重的问题。1）. CFSE对细胞有剧毒。CFSE不加选择地与所有氨基发生反应，从而改变许多关键的细胞内蛋白质功能（如细胞膜GPCR）;2）.CFSE响应缓慢，使用不方便。第二代细胞的CFSE荧光强度比第一代降低2倍以上。您必须等待下一代才能开始细胞增殖分析。10）. 需要去除培养基。您必须使用流式细胞仪去除培养基进行细胞分析，因为CFSE会与培养基组分发生反应。CytoTell™ Green的开发是为了消除这些CFSE限制。根据客户对CytoTell Green的反馈，CytoTell™™ UltraGreen是我们最新的改进。它具有明显的优势。1）. CytoTell UltraGreen™在细胞中保留良好;3）. CytoTell UltraGreen™表现出比CFSE更快的响应速度和使用更方便。第一代和第二代之间的荧光强度差距显著减小。当细胞分裂时，CytoTell™ UltraGreen在子细胞之间平均分布，可以测量为染料荧光强度连续减半;1）. CytoTell™ UltraGreen比CFSE更敏感。最多可可视化 2 代;1）. CytoTell™ UltraGreen比CFSE稳定得多。CytoTell UltraGreen™储备溶液可以在室温下储存几天。CytoTell™ UltraGreen也可用于标记细胞的长期跟踪。使用双参数图进行分析可以提供更好的每一代分辨率，尤其是在未分割像元和第一代之间。CytoTell™ UltraGreen具有2 nm的峰值激发，可以被蓝色（3 nm）激光线激发，使其与FITC滤光片组兼容。
 
平台
流式细胞仪
Excitation  488 nm 激光
Emission    530/30 nm 滤光片
仪器规格    FITC频道
 
示例协议
 
一目了然
协议摘要

1. 用测试化合物制备细胞
2. 加入1X染料工作液
3. 在室温或37下用细胞孵育染料oC 10 到 30 分钟
4. 去除染料工作溶液
5. 使用带有适当滤光片组的流式细胞仪进行分析

 
 
重要事项 在开始实验之前，将所有试剂盒组件置于室温下。注意：CytoTell™染料是冻干粉末。如果储存在-6°C，它们应稳定至少20个月，避光，避免冻融循环。
 
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
 
CytoTell™ dye stock solution (500X)
将 500 μL DMSO 加入染料粉末小瓶中，通过涡旋充分混合以获得储备溶液 （500X）。注意：应及时使用储备溶液;任何剩余的溶液都应等分并冷冻在 < - 20oC.避免反复冻融循环，并避光。
 
工作溶液的制备
CytoTellTM dye working solution (1X)
使用前，立即将 500X DMSO 储备溶液在 1 至 500 的 Hanks 和 20 mM Hepes 缓冲液 （HHBS） 或您选择的缓冲液 pH 7（例如 1 μL 500X DMSO 储备溶液至 500 μL 缓冲液）中稀释。通过涡旋将它们充分混合。注意：染料工作溶液的最终浓度应根据不同细胞类型和/或实验条件的经验确定。建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。例如CytoTell™ Red在某些细胞类型中使用的量可能比推荐浓度少得多。
 
实验方案样本

1. 用测试化合物处理细胞所需的时间。
2. 离心细胞得到1-5×105每管细胞数。
3. 将细胞重悬于 500 μL CytoTell™ 染料工作溶液中。可选：无需去除培养基即可将 500X DMSO 储备溶液直接添加到细胞中（例如，将 1 μL500X DMSO 储备溶液添加到 500 μL 细胞中）
4. 用染料溶液在室温或37°C下孵育细胞10至30分钟，避光。
5. 从细胞中取出染料工作溶液，用您选择的HHBS或缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于 500 μL 预热的 HHBS 或培养基中，得到 1-5 × 105每管细胞数。
6. 用流式细胞仪或荧光显微镜监测Ex / Em（见表1）下的荧光变化。