产品说明：
        流式细胞术结合荧光染色是分析异质细胞群的强大工具。CFSE是所有现有荧光染料中广泛用于活细胞分析的 shou xuan 细胞增殖指示剂。然而，由于CFSE及其荧光素类似物的激发和发射光谱几乎与GFP或FITC相同，因此不可能将CFSE及其荧光素类似物用于GFP转染细胞或使用FITC标记抗体的应用。CytoTell™ 染料在主要激光线（如 405 nm、488 nm 或 633 nm）上具有多色发射。CytoTell™染料具有最小的细胞毒性，可用于GFP细胞系或FITC标记抗体的多色应用，因为它们具有不同于荧光素的激发或发射光谱。CytoTell™ Violet 500是一种紫色激光激发的绿色荧光染料，可均匀染色细胞。当细胞分裂时，染料在子细胞之间均匀分布，这可以测量为染料荧光强度的连续减半。用CytoTell™ Violet 500标记的细胞可以固定和透化，以使用标准含甲醛固定剂和基于皂苷的透化缓冲液分析细胞内靶标。CytoTell™ Violet 500的峰值激发波长为405 nm，可以被紫色（405 nm）激光线激发。它的峰值发射波长为500 nm，可以使用500/20带通滤光片（相当于BD Horizon® V500）进行检测，使其与利用GFP或FITC抗体进行多色细胞分析的应用兼容。
平台
流式细胞仪
Excitation：405 nm 激光
Emission：525/50 nm 滤光片
仪器规格：Pacific Orange channel

1. 用测试化合物制备细胞
2. 加入1X染料工作液
3. 在室温或37下用细胞孵育染料^oC 10 到 30 分钟
4. 去除染料工作溶液
5. 使用带有适当滤光片组的流式细胞仪进行分析

重要事项：在开始实验之前，将所有试剂盒组件置于室温下。注意：CytoTell™染料是冻干粉末。如果储存在-6°C，它们应稳定至少20个月，避光，避免冻融循环。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
CytoTell 染料储备溶液 （500X）：
将 500 μL DMSO 加入染料粉末小瓶中，通过涡旋充分混合以获得储备溶液 （500X）。™注意：应及时使用储备溶液;任何剩余的溶液都应等分并冷冻在 < - 20oC.避免反复冻融循环，并避光。
工作溶液的制备
CytoTell^TM染料工作液（1X）：
使用前，立即将 500X DMSO 储备溶液在 1 至 500 的 Hanks 和 20 mM Hepes 缓冲液 （HHBS） 或您选择的缓冲液 pH 7（例如 1 μL 500X DMSO 储备溶液至 500 μL 缓冲液）中稀释。通过涡旋将它们充分混合。注意：染料工作溶液的最终浓度应根据经验确定，以适应不同的细胞类型和/或实验条件。建议在至少超过十倍范围的浓度下进行测试。例如CytoTell™ Red在某些细胞类型中使用的量可能比推荐浓度少得多。
实验方案样本

1. 用测试化合物处理细胞所需的时间。
2. 离心细胞得到1-5×10⁵每管细胞数。
3. 将细胞重悬于 500 μL CytoTell™ 染料工作溶液中。可选：无需去除培养基即可将 500X DMSO 储备溶液直接添加到细胞中（例如，将 1 μL500X DMSO 储备溶液添加到 500 μL 细胞中）
4. 用染料溶液在室温或37°C下孵育细胞10至30分钟，避光。
5. 从细胞中取出染料工作溶液，用您选择的HHBS或缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于 500 μL 预热的 HHBS 或培养基中，得到 1-5 × 10⁵每管细胞数。
6. 用流式细胞仪或荧光显微镜监测Ex / Em（见表1）下的荧光变化。