产品说明：
MycoLight™ 快速荧光细菌革兰氏染色试剂盒为测定活细菌中的革兰氏体征提供了一种简单方便的方法。革兰氏染色是临床和研究环境中常用的方法，用于分类学将细菌种类分为两大类。不幸的是，传统的革兰氏染色方法很乏味，并且涉及细菌固定，如果要进一步表征细菌，这可能是一个显着的缺点。MycoLight™ 快速荧光细菌革兰氏染色试剂盒为活细菌提供了一步法革兰氏染色检测，克服了传统革兰氏染色检测中固有的问题。MycoLight 快速荧光细菌革兰氏染色试剂盒利用两种 DNA 染料 MycoLight Green 和 MycoLight™™™ Red，对革兰氏阳性和阴性细菌进行染色的能力不同。MycoLight Green 可对革兰氏阳性和阴性细菌进行染色，而 MycoLight™™ Red 优先标记革兰氏阳性细菌。这两种染料的激发/发射最大值对于MycoLight Green约为484/504 nm，对于MycoLight™™ Red约为518/600 nm。因此，当革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的混合物用染料染色时，革兰氏阳性细菌会发出红色荧光，革兰氏阴性细菌会发出绿色荧光。革兰氏阳性和阴性染色可以分别用TRITC和FITC滤光片组进行荧光监测。
平台
荧光显微镜
Excitation：488 纳米 / 540 纳米
Emission：530 纳米 / 620 纳米
推荐板：黑色墙壁/透明底部
仪器规格：FITC / TRITC 过滤器
组件
组件 A：MycoLight™ Green：1 瓶 （100 μL）
组件 B：MycoLight™ Red：1 瓶 （100 μL）

1. 制备百合样品
2. 制备MycoLight™染料工作溶液并将其添加到细菌样品中
3. 用MycoLight™染料工作溶液在室温下在黑暗中孵育15分钟
4. 使用FITC和TRITC滤光片组通过荧光显微镜或荧光光谱分析样品

重要事项：使用前在室温下解冻所有试剂盒组件。
工作溶液的制备
MycoLight™ dye working solution
在试管中混合等体积的MycoLight™ Green（组分A）和MycoLight™ Red（组分B）并充分混合。
实验方案样本
细菌样品的制备

1. 制备浓度在10左右的细菌样品⁷细胞/毫升。在适当的培养基中将细菌培养到对数后期。注意：测量波长= 600nm（OD 600）的细菌培养物的光密度以确定细胞数。对于大肠杆菌培养，OD 600 = 1.0 等于 8 x 108细胞/毫升。
2. 以10，000×g离心10分钟除去培养基，然后将沉淀重新悬浮在ddH中2O、调节细菌浓度至~10⁷细胞/毫升。

染色方案

1. 将 2 μL MycoLight™ 染料工作溶液加入 100 μL 细菌悬浮液中。
2. 充分混合并在室温下在黑暗中孵育15分钟。
3. 用荧光显微镜通过FITC通道（Ex / Em = 488 / 530 nm）通道监测细菌的荧光，用于革兰氏阴性细菌，TRITC（Ex / Em = 540 / 620 nm）通道用于革兰氏阳性细菌。注意：该协议仅提供指南，应根据不同的细菌菌株或其他特定需求进行优化。注意：群体中革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的相对比例也可以使用该试剂盒的荧光光谱估计。图中包括样本分析。